国际医药卫生导报
國際醫藥衛生導報
국제의약위생도보
INTERNATIONAL MEDICINE & HEALTH GUIDANCE NEWS
2013年
11期
1679-1682
,共4页
人凝血因子IX(hFIX)%毕赤酵母%蛋白表达
人凝血因子IX(hFIX)%畢赤酵母%蛋白錶達
인응혈인자IX(hFIX)%필적효모%단백표체
目的 人凝血因子IX(hFIX蛋白)在人类内源性凝血过程中起着非常重要的作用.hFIX表达量绝对或相对不足会导致B型血友病.本研究用毕赤酵母生产重组hFIX.方法 首先用RT-PCR将人肝脏hFIX的mRNA进行扩增、测序并插入到pPIC9K中载体,构建pPIC9K-hFIX酵母分泌表达载体,再将pPIC9K-hFIX电转化进入毕赤酵母SMD1168,然后通过G418抗药性能力的大小筛选获得高拷贝且表达量高的重组菌株.结果 通过SDS-PAGE和免疫印迹分析表明本研究获得的重组毕赤酵母hFⅨ表达量达到100 mg/L；经过阴离子交换和半透膜扩散透析得到纯化的蛋白.检测重组hFⅨ的比活力,约为天然hFIX凝血活性的5.5％.结论 我们可以优化找到更好的生产条件,使用其他比SMD1168更好的菌株,以获取更好生产量和质量；另外,我们也有很多可以增强在酵母生产的hFIX的活性.
目的 人凝血因子IX(hFIX蛋白)在人類內源性凝血過程中起著非常重要的作用.hFIX錶達量絕對或相對不足會導緻B型血友病.本研究用畢赤酵母生產重組hFIX.方法 首先用RT-PCR將人肝髒hFIX的mRNA進行擴增、測序併插入到pPIC9K中載體,構建pPIC9K-hFIX酵母分泌錶達載體,再將pPIC9K-hFIX電轉化進入畢赤酵母SMD1168,然後通過G418抗藥性能力的大小篩選穫得高拷貝且錶達量高的重組菌株.結果 通過SDS-PAGE和免疫印跡分析錶明本研究穫得的重組畢赤酵母hFⅨ錶達量達到100 mg/L；經過陰離子交換和半透膜擴散透析得到純化的蛋白.檢測重組hFⅨ的比活力,約為天然hFIX凝血活性的5.5％.結論 我們可以優化找到更好的生產條件,使用其他比SMD1168更好的菌株,以穫取更好生產量和質量；另外,我們也有很多可以增彊在酵母生產的hFIX的活性.
목적 인응혈인자IX(hFIX단백)재인류내원성응혈과정중기착비상중요적작용.hFIX표체량절대혹상대불족회도치B형혈우병.본연구용필적효모생산중조hFIX.방법 수선용RT-PCR장인간장hFIX적mRNA진행확증、측서병삽입도pPIC9K중재체,구건pPIC9K-hFIX효모분비표체재체,재장pPIC9K-hFIX전전화진입필적효모SMD1168,연후통과G418항약성능력적대소사선획득고고패차표체량고적중조균주.결과 통과SDS-PAGE화면역인적분석표명본연구획득적중조필적효모hFⅨ표체량체도100 mg/L；경과음리자교환화반투막확산투석득도순화적단백.검측중조hFⅨ적비활력,약위천연hFIX응혈활성적5.5％.결론 아문가이우화조도경호적생산조건,사용기타비SMD1168경호적균주,이획취경호생산량화질량；령외,아문야유흔다가이증강재효모생산적hFIX적활성.
