中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
7期
574-577
,共4页
刺激隐核虫%18S-ITS2基因序列%环介导恒温基因扩增检测法
刺激隱覈蟲%18S-ITS2基因序列%環介導恆溫基因擴增檢測法
자격은핵충%18S-ITS2기인서렬%배개도항온기인확증검측법
Cryptocaryon irritans%18S-ITS2 gene%LAMP method
为提高大黄鱼刺激隐核虫病的病原体检出率,本研究针对刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans) 18S-ITS2基因序列设计4条LAMP引物,在内外引物浓度比2∶1～6∶1、Mg2+浓度2 mmol/L、反应温度61℃～66℃、反应时间60 min的优化条件下,扩增产物经电泳后呈现特异性的LAMP梯形条带.本研究建立的LAMP方法具有高灵敏度(10-7 ng/μL DNA浓度),比常规PCR方法高100倍.将该方法应用于采集自不同地域的虫体样本、病鱼和水样以及不同组织样品的检测,结果在13份样品中有10份检出阳性,并显示该方法既能够检测发病鱼,也能够检出已感染但未发病的鱼.实验表明,该方法是一种能够快速、简易、特异、敏感地检测海水鱼类刺激隐核虫病的病原学检测方法.
為提高大黃魚刺激隱覈蟲病的病原體檢齣率,本研究針對刺激隱覈蟲(Cryptocaryon irritans) 18S-ITS2基因序列設計4條LAMP引物,在內外引物濃度比2∶1～6∶1、Mg2+濃度2 mmol/L、反應溫度61℃～66℃、反應時間60 min的優化條件下,擴增產物經電泳後呈現特異性的LAMP梯形條帶.本研究建立的LAMP方法具有高靈敏度(10-7 ng/μL DNA濃度),比常規PCR方法高100倍.將該方法應用于採集自不同地域的蟲體樣本、病魚和水樣以及不同組織樣品的檢測,結果在13份樣品中有10份檢齣暘性,併顯示該方法既能夠檢測髮病魚,也能夠檢齣已感染但未髮病的魚.實驗錶明,該方法是一種能夠快速、簡易、特異、敏感地檢測海水魚類刺激隱覈蟲病的病原學檢測方法.
위제고대황어자격은핵충병적병원체검출솔,본연구침대자격은핵충(Cryptocaryon irritans) 18S-ITS2기인서렬설계4조LAMP인물,재내외인물농도비2∶1～6∶1、Mg2+농도2 mmol/L、반응온도61℃～66℃、반응시간60 min적우화조건하,확증산물경전영후정현특이성적LAMP제형조대.본연구건립적LAMP방법구유고령민도(10-7 ng/μL DNA농도),비상규PCR방법고100배.장해방법응용우채집자불동지역적충체양본、병어화수양이급불동조직양품적검측,결과재13빈양품중유10빈검출양성,병현시해방법기능구검측발병어,야능구검출이감염단미발병적어.실험표명,해방법시일충능구쾌속、간역、특이、민감지검측해수어류자격은핵충병적병원학검측방법.
