胃肠病学和肝病学杂志
胃腸病學和肝病學雜誌
위장병학화간병학잡지
CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
2013年
7期
684-687
,共4页
刘红红%陈小华%周丽芹%刘雪妮%余永胜%臧国庆%汤正好
劉紅紅%陳小華%週麗芹%劉雪妮%餘永勝%臧國慶%湯正好
류홍홍%진소화%주려근%류설니%여영성%장국경%탕정호
CTP%Tapasin%HBcAg18-27%融合蛋白
CTP%Tapasin%HBcAg18-27%融閤蛋白
CTP%Tapasin%HBcAg18-27%융합단백
CTP%Tapasin%HBcAg18-27%Fusion protein
目的 构建CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合基因表达质粒并分离、纯化融合蛋白.方法 以质粒pCMV-SPORT6中Tapasin 基因为模板,设计一对引物,上游引物带有融合基因CTP-HBcAg18-27序列,进行PCR反应；PCR产物回收纯化克隆到质粒pREST-B 中,双酶切及测序鉴定；将鉴定正确的质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达；镍柱亲和层析法纯化融合蛋白；Western blotting 鉴定融合蛋白.结果 由质粒pCMV-SPORT6 PCR扩增得到1480 bp大小的条带,为CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合序列；将其克隆到表达质粒pREST-B后经酶切、测序结果正确；表达质粒转化DE3后成功表达,经纯化得到52.3 KD的蛋白；Western blotting鉴定为CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白.结论 成功构建了CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合表达质粒,并成功表达,为进一步研究此融合蛋白的功能提供了实验基础.
目的 構建CTP-HBcAg18-27-Tapasin融閤基因錶達質粒併分離、純化融閤蛋白.方法 以質粒pCMV-SPORT6中Tapasin 基因為模闆,設計一對引物,上遊引物帶有融閤基因CTP-HBcAg18-27序列,進行PCR反應；PCR產物迴收純化剋隆到質粒pREST-B 中,雙酶切及測序鑒定；將鑒定正確的質粒轉化大腸埃希菌BL21(DE3)誘導錶達；鎳柱親和層析法純化融閤蛋白；Western blotting 鑒定融閤蛋白.結果 由質粒pCMV-SPORT6 PCR擴增得到1480 bp大小的條帶,為CTP-HBcAg18-27-Tapasin融閤序列；將其剋隆到錶達質粒pREST-B後經酶切、測序結果正確；錶達質粒轉化DE3後成功錶達,經純化得到52.3 KD的蛋白；Western blotting鑒定為CTP-HBcAg18-27-Tapasin融閤蛋白.結論 成功構建瞭CTP-HBcAg18-27-Tapasin融閤錶達質粒,併成功錶達,為進一步研究此融閤蛋白的功能提供瞭實驗基礎.
목적 구건CTP-HBcAg18-27-Tapasin융합기인표체질립병분리、순화융합단백.방법 이질립pCMV-SPORT6중Tapasin 기인위모판,설계일대인물,상유인물대유융합기인CTP-HBcAg18-27서렬,진행PCR반응；PCR산물회수순화극륭도질립pREST-B 중,쌍매절급측서감정；장감정정학적질립전화대장애희균BL21(DE3)유도표체；얼주친화층석법순화융합단백；Western blotting 감정융합단백.결과 유질립pCMV-SPORT6 PCR확증득도1480 bp대소적조대,위CTP-HBcAg18-27-Tapasin융합서렬；장기극륭도표체질립pREST-B후경매절、측서결과정학；표체질립전화DE3후성공표체,경순화득도52.3 KD적단백；Western blotting감정위CTP-HBcAg18-27-Tapasin융합단백.결론 성공구건료CTP-HBcAg18-27-Tapasin융합표체질립,병성공표체,위진일보연구차융합단백적공능제공료실험기출.
