广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
10期
149-151
,共3页
张道伟%曾燕玲%魏福伦%周德贵
張道偉%曾燕玲%魏福倫%週德貴
장도위%증연령%위복륜%주덕귀
二斑叶螨%cDNA文库%滴度%重组效率
二斑葉螨%cDNA文庫%滴度%重組效率
이반협만%cDNA문고%적도%중조효솔
为研究二斑叶螨发育相关基因的功能,利用TRIzol试剂提取二斑叶螨总RNA,通过SMART技术构建cDNA文库.利用SMART ⅣTM Oligonucleotide和CDSIII/3'PCR Primer为引物,在反转录酶作用下,合成cDNA第1链,利用LD-PCR方法合成cDNA第2链.合成的双链cDNA经酶切回收后,再连接pDNR-LIB载体,转化大肠杆菌感受态细胞Trans 5α,检验库容量和重组效率,并采用PCR方法检测插入cDNA片段的大小.结果表明,构建的二斑叶螨cDNA文库的库容量为3.54×106CFU/mL,重组效率达95.8％,插入片段长度在0.3～2.0kb之间.构建的二斑叶螨cDNA文库质量良好,能够为进一步研究二斑叶螨基因的功能奠定基础.
為研究二斑葉螨髮育相關基因的功能,利用TRIzol試劑提取二斑葉螨總RNA,通過SMART技術構建cDNA文庫.利用SMART ⅣTM Oligonucleotide和CDSIII/3'PCR Primer為引物,在反轉錄酶作用下,閤成cDNA第1鏈,利用LD-PCR方法閤成cDNA第2鏈.閤成的雙鏈cDNA經酶切迴收後,再連接pDNR-LIB載體,轉化大腸桿菌感受態細胞Trans 5α,檢驗庫容量和重組效率,併採用PCR方法檢測插入cDNA片段的大小.結果錶明,構建的二斑葉螨cDNA文庫的庫容量為3.54×106CFU/mL,重組效率達95.8％,插入片段長度在0.3～2.0kb之間.構建的二斑葉螨cDNA文庫質量良好,能夠為進一步研究二斑葉螨基因的功能奠定基礎.
위연구이반협만발육상관기인적공능,이용TRIzol시제제취이반협만총RNA,통과SMART기술구건cDNA문고.이용SMART ⅣTM Oligonucleotide화CDSIII/3'PCR Primer위인물,재반전록매작용하,합성cDNA제1련,이용LD-PCR방법합성cDNA제2련.합성적쌍련cDNA경매절회수후,재련접pDNR-LIB재체,전화대장간균감수태세포Trans 5α,검험고용량화중조효솔,병채용PCR방법검측삽입cDNA편단적대소.결과표명,구건적이반협만cDNA문고적고용량위3.54×106CFU/mL,중조효솔체95.8％,삽입편단장도재0.3～2.0kb지간.구건적이반협만cDNA문고질량량호,능구위진일보연구이반협만기인적공능전정기출.
