介入放射学杂志
介入放射學雜誌
개입방사학잡지
JOURNAL OF INTERVENTIONAL RADIOLOGY
2013年
9期
750-755
,共6页
吴志平%邓钢%侯居攀%赵国峰%许荣睿%文颂%秦永林%柏志斌%滕皋军
吳誌平%鄧鋼%侯居攀%趙國峰%許榮睿%文頌%秦永林%柏誌斌%滕皋軍
오지평%산강%후거반%조국봉%허영예%문송%진영림%백지빈%등고군
人血栓调节蛋白%转染%内皮祖细胞
人血栓調節蛋白%轉染%內皮祖細胞
인혈전조절단백%전염%내피조세포
human thrombomodulin%transfection%endothelial progenitor cell
目的 探讨人血栓调节蛋白(hTM)基因转染兔内皮祖细胞(EPCs)的可行性及效率,为hTM修饰的EPCs活体移植预防经皮腔内血管成形术术后血管内再狭窄提供实验依据.方法 采用基因工程方法构建重组质粒pcDNA3.1-hTM.梯度离心法分离兔外周血单个核细胞(MNCs),贴壁筛选出EPCs,通过免疫组化检测其CD34、vWF、KDR等内皮系抗原,通过Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1荧光染料双吞实验进一步表征EPCs pcDNA3.1-hTM转染EPCs,转染48 h后行细胞免疫荧光染色,72 h后行Western印迹检测比较重组质粒转染组、空载质粒转染组和对照组hTM表达水平.转染后分别于第3、4、5天采用四氮噻唑蓝法(MTT)比较各组细胞增殖活性.结果 双酶切及基因测序鉴定均证实pcDNA3.1-hTM重组质粒构建成功；细胞表面抗原及免疫荧光双标实验表明所培养细胞为EPCs.转染后的直接免疫荧光实验及Western印迹检测证实hTM在重组质粒转染组的表达高于对照组；MTT比色实验示重组质粒转染组、空载质粒组、空白对照组在第3、4、5天吸光度值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建pcDNA3.1-hTM重组质粒,转染兔外周血EPCs后可使EPCs成功表达TM,且对EPCs的活力、增殖等生物学性质无明显影响.
目的 探討人血栓調節蛋白(hTM)基因轉染兔內皮祖細胞(EPCs)的可行性及效率,為hTM脩飾的EPCs活體移植預防經皮腔內血管成形術術後血管內再狹窄提供實驗依據.方法 採用基因工程方法構建重組質粒pcDNA3.1-hTM.梯度離心法分離兔外週血單箇覈細胞(MNCs),貼壁篩選齣EPCs,通過免疫組化檢測其CD34、vWF、KDR等內皮繫抗原,通過Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1熒光染料雙吞實驗進一步錶徵EPCs pcDNA3.1-hTM轉染EPCs,轉染48 h後行細胞免疫熒光染色,72 h後行Western印跡檢測比較重組質粒轉染組、空載質粒轉染組和對照組hTM錶達水平.轉染後分彆于第3、4、5天採用四氮噻唑藍法(MTT)比較各組細胞增殖活性.結果 雙酶切及基因測序鑒定均證實pcDNA3.1-hTM重組質粒構建成功；細胞錶麵抗原及免疫熒光雙標實驗錶明所培養細胞為EPCs.轉染後的直接免疫熒光實驗及Western印跡檢測證實hTM在重組質粒轉染組的錶達高于對照組；MTT比色實驗示重組質粒轉染組、空載質粒組、空白對照組在第3、4、5天吸光度值差異無統計學意義(P＞0.05).結論 成功構建pcDNA3.1-hTM重組質粒,轉染兔外週血EPCs後可使EPCs成功錶達TM,且對EPCs的活力、增殖等生物學性質無明顯影響.
목적 탐토인혈전조절단백(hTM)기인전염토내피조세포(EPCs)적가행성급효솔,위hTM수식적EPCs활체이식예방경피강내혈관성형술술후혈관내재협착제공실험의거.방법 채용기인공정방법구건중조질립pcDNA3.1-hTM.제도리심법분리토외주혈단개핵세포(MNCs),첩벽사선출EPCs,통과면역조화검측기CD34、vWF、KDR등내피계항원,통과Dil-ac-LDL급FITC-UEA-1형광염료쌍탄실험진일보표정EPCs pcDNA3.1-hTM전염EPCs,전염48 h후행세포면역형광염색,72 h후행Western인적검측비교중조질립전염조、공재질립전염조화대조조hTM표체수평.전염후분별우제3、4、5천채용사담새서람법(MTT)비교각조세포증식활성.결과 쌍매절급기인측서감정균증실pcDNA3.1-hTM중조질립구건성공；세포표면항원급면역형광쌍표실험표명소배양세포위EPCs.전염후적직접면역형광실험급Western인적검측증실hTM재중조질립전염조적표체고우대조조；MTT비색실험시중조질립전염조、공재질립조、공백대조조재제3、4、5천흡광도치차이무통계학의의(P＞0.05).결론 성공구건pcDNA3.1-hTM중조질립,전염토외주혈EPCs후가사EPCs성공표체TM,차대EPCs적활력、증식등생물학성질무명현영향.
