宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2013年
7期
738-742,747
,共6页
王博%丁晓%颜贝%高玉婧%蒲静%裴秀英
王博%丁曉%顏貝%高玉婧%蒲靜%裴秀英
왕박%정효%안패%고옥청%포정%배수영
结核分枝杆菌%Ag85B%TB10.4%基因融合%生物信息学
結覈分枝桿菌%Ag85B%TB10.4%基因融閤%生物信息學
결핵분지간균%Ag85B%TB10.4%기인융합%생물신식학
目的 构建结核分枝杆菌Ag85B、TB10.4及Ag85B-TB10.4融合表达载体,并进行抗原的生物信息学分析,为候选疫苗筛选奠定基础.方法 从结核分枝杆菌H37Rv菌株中分别扩增出Ag85B基因,TB10.4基因,Ag85B-TB10.4;将Ag85B克隆入pET-28a(+)表达载体中,将TB10.4和Ag85B-TB10.4分别克隆入pET-SUMO表达载体中.上述重组质粒转化入大肠埃希杆菌BL21菌中(DE3),经IPTG诱导表达,并对其进行生物信息学分析.结果 (1)成功将结核分枝杆菌Ag85B和TB10.4,Ag85B-TB10.4基因分别克隆入pET28a(+)和pET-SUMO表达载体中,经IPTG诱导蛋白表达后,对经超声裂解的菌液上清进行SDS-PAGE电泳,表明获得了与预期蛋白大小一致的表达产物,重组融合蛋白pET-SUMO-Ag85B-TB10.4蛋白分子质量约为54kDa.(2)生物信息学分析显示Ag85B-TB10.4融合蛋白具有多个潜在抗原位点.结论 成功构建了重组质粒pET-28a-Ag85B,pET-SUMO-TB10.4和pET-SUMO-Ag85B-TB10.4,并获得了Ag85B,TB10.4和 Ag85B-TB10.4的可溶性原核表达产物;生物信息学分析在Ag85B 与TB10.4蛋白加入一段蛋白linker后蛋白的亲水性增强,抗原决定簇面积增大,为后续的功能实验研究奠定了基础.
目的 構建結覈分枝桿菌Ag85B、TB10.4及Ag85B-TB10.4融閤錶達載體,併進行抗原的生物信息學分析,為候選疫苗篩選奠定基礎.方法 從結覈分枝桿菌H37Rv菌株中分彆擴增齣Ag85B基因,TB10.4基因,Ag85B-TB10.4;將Ag85B剋隆入pET-28a(+)錶達載體中,將TB10.4和Ag85B-TB10.4分彆剋隆入pET-SUMO錶達載體中.上述重組質粒轉化入大腸埃希桿菌BL21菌中(DE3),經IPTG誘導錶達,併對其進行生物信息學分析.結果 (1)成功將結覈分枝桿菌Ag85B和TB10.4,Ag85B-TB10.4基因分彆剋隆入pET28a(+)和pET-SUMO錶達載體中,經IPTG誘導蛋白錶達後,對經超聲裂解的菌液上清進行SDS-PAGE電泳,錶明穫得瞭與預期蛋白大小一緻的錶達產物,重組融閤蛋白pET-SUMO-Ag85B-TB10.4蛋白分子質量約為54kDa.(2)生物信息學分析顯示Ag85B-TB10.4融閤蛋白具有多箇潛在抗原位點.結論 成功構建瞭重組質粒pET-28a-Ag85B,pET-SUMO-TB10.4和pET-SUMO-Ag85B-TB10.4,併穫得瞭Ag85B,TB10.4和 Ag85B-TB10.4的可溶性原覈錶達產物;生物信息學分析在Ag85B 與TB10.4蛋白加入一段蛋白linker後蛋白的親水性增彊,抗原決定簇麵積增大,為後續的功能實驗研究奠定瞭基礎.
목적 구건결핵분지간균Ag85B、TB10.4급Ag85B-TB10.4융합표체재체,병진행항원적생물신식학분석,위후선역묘사선전정기출.방법 종결핵분지간균H37Rv균주중분별확증출Ag85B기인,TB10.4기인,Ag85B-TB10.4;장Ag85B극륭입pET-28a(+)표체재체중,장TB10.4화Ag85B-TB10.4분별극륭입pET-SUMO표체재체중.상술중조질립전화입대장애희간균BL21균중(DE3),경IPTG유도표체,병대기진행생물신식학분석.결과 (1)성공장결핵분지간균Ag85B화TB10.4,Ag85B-TB10.4기인분별극륭입pET28a(+)화pET-SUMO표체재체중,경IPTG유도단백표체후,대경초성렬해적균액상청진행SDS-PAGE전영,표명획득료여예기단백대소일치적표체산물,중조융합단백pET-SUMO-Ag85B-TB10.4단백분자질량약위54kDa.(2)생물신식학분석현시Ag85B-TB10.4융합단백구유다개잠재항원위점.결론 성공구건료중조질립pET-28a-Ag85B,pET-SUMO-TB10.4화pET-SUMO-Ag85B-TB10.4,병획득료Ag85B,TB10.4화 Ag85B-TB10.4적가용성원핵표체산물;생물신식학분석재Ag85B 여TB10.4단백가입일단단백linker후단백적친수성증강,항원결정족면적증대,위후속적공능실험연구전정료기출.
