CAJ | 학술논문

细胞永生化在基因功能验证、转基因动物制作、药物研发等领域发挥关键作用,然而由于细胞永生化难度大,所以到目前为止仅有少数种类的细胞被永生化.为了解决这一技术问题,本研究拟通过构建人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的慢病毒表达载体来提高原代细胞永生化效率,从而最终建立细胞系.本研究先用PCR的方法从载体pBABE-neo-hTERT上扩增获得hTERT基因片段,然后将其连接到慢病毒骨架载体pLV-puro上,最终获得目标载体pLV-puro-hTERT.为了验证这一载体的有效性,先将其包装成慢病毒颗粒,再对猪原代前体脂肪细胞进行侵染,然后用嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,之后检测了阳性克隆的端粒酶的活性、细胞增殖和分化能力.研究结果表明,与对照组相比,pLV-puro-hTERT慢病毒侵染猪前体脂肪细胞,可使细胞端粒酶mRNA的表达水平上调12倍,并极显著的促进了猪前体脂肪细胞的增殖,同时不影响猪前体脂肪细胞的分化.本研究所构建的慢病毒表达载体能够有效的提高原代细胞的增殖能力,同时保持了原代细胞的生物学特性,这将为进一步永生化原代细胞提供便利.
세포영생화재기인공능험증、전기인동물제작、약물연발등영역발휘관건작용,연이유우세포영생화난도대,소이도목전위지부유소수충류적세포피영생화.위료해결저일기술문제,본연구의통과구건인단립매역전록매기인(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)적만병독표체재체래제고원대세포영생화효솔,종이최종건립세포계.본연구선용PCR적방법종재체pBABE-neo-hTERT상확증획득hTERT기인편단,연후장기련접도만병독골가재체pLV-puro상,최종획득목표재체pLV-puro-hTERT.위료험증저일재체적유효성,선장기포장성만병독과립,재대저원대전체지방세포진행침염,연후용표령매소사선획득양성극륭,지후검측료양성극륭적단립매적활성、세포증식화분화능력.연구결과표명,여대조조상비,pLV-puro-hTERT만병독침염저전체지방세포,가사세포단립매mRNA적표체수평상조12배,병겁현저적촉진료저전체지방세포적증식,동시불영향저전체지방세포적분화.본연구소구건적만병독표체재체능구유효적제고원대세포적증식능력,동시보지료원대세포적생물학특성,저장위진일보영생화원대세포제공편리.