中国蔬菜
中國蔬菜
중국소채
CHINA VEGETABLES
2013年
10期
29-35
,共7页
陈巧%陈书霞%王聪颖%郝丽宁%万旭花%申晓青%程智慧
陳巧%陳書霞%王聰穎%郝麗寧%萬旭花%申曉青%程智慧
진교%진서하%왕총영%학려저%만욱화%신효청%정지혜
黄瓜%脂氧合酶%原核表达
黃瓜%脂氧閤酶%原覈錶達
황과%지양합매%원핵표체
以先前克隆到的黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2全长的cDNA为模板,用含有特异性酶切位点的Yh1、Yh2为引物,通过PCR方法将黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2的ORF区构建到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1上获得原核表达载体p4t-LOX2,将该表达载体p4t-LOX2转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,获得相应的重组工程菌.在IPTG诱导下,通过SDS-PAGE电泳,得到一条约115 kD的融合蛋白条带,除去pGEX-4T-1自身诱导的约26 kD大小的GST标签蛋白后,CsL OX2编码一个约89 kD的蛋白.经过融合蛋白表达体系的优化分析,表明该融合蛋白在37℃,0.80 mmol·L-1 IPTG诱导表达10.5 h,可获得融合蛋白的最大表达量.
以先前剋隆到的黃瓜脂氧閤酶基因CsLOX2全長的cDNA為模闆,用含有特異性酶切位點的Yh1、Yh2為引物,通過PCR方法將黃瓜脂氧閤酶基因CsLOX2的ORF區構建到大腸桿菌錶達載體pGEX-4T-1上穫得原覈錶達載體p4t-LOX2,將該錶達載體p4t-LOX2轉化到大腸桿菌菌株BL21(DE3)中,穫得相應的重組工程菌.在IPTG誘導下,通過SDS-PAGE電泳,得到一條約115 kD的融閤蛋白條帶,除去pGEX-4T-1自身誘導的約26 kD大小的GST標籤蛋白後,CsL OX2編碼一箇約89 kD的蛋白.經過融閤蛋白錶達體繫的優化分析,錶明該融閤蛋白在37℃,0.80 mmol·L-1 IPTG誘導錶達10.5 h,可穫得融閤蛋白的最大錶達量.
이선전극륭도적황과지양합매기인CsLOX2전장적cDNA위모판,용함유특이성매절위점적Yh1、Yh2위인물,통과PCR방법장황과지양합매기인CsLOX2적ORF구구건도대장간균표체재체pGEX-4T-1상획득원핵표체재체p4t-LOX2,장해표체재체p4t-LOX2전화도대장간균균주BL21(DE3)중,획득상응적중조공정균.재IPTG유도하,통과SDS-PAGE전영,득도일조약115 kD적융합단백조대,제거pGEX-4T-1자신유도적약26 kD대소적GST표첨단백후,CsL OX2편마일개약89 kD적단백.경과융합단백표체체계적우화분석,표명해융합단백재37℃,0.80 mmol·L-1 IPTG유도표체10.5 h,가획득융합단백적최대표체량.
