中华神经外科疾病研究杂志
中華神經外科疾病研究雜誌
중화신경외과질병연구잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROSURGICAL DISEASE RESEARCH
2014年
4期
317-321
,共5页
窦以河%何裕超%江水%刘世海%王衍刚%隋爱华%车树圣
竇以河%何裕超%江水%劉世海%王衍剛%隋愛華%車樹聖
두이하%하유초%강수%류세해%왕연강%수애화%차수골
靶向溶瘤腺病毒载体%重组腺病毒%脑胶质瘤
靶嚮溶瘤腺病毒載體%重組腺病毒%腦膠質瘤
파향용류선병독재체%중조선병독%뇌효질류
Targeting%oncolytic%adenovirus%vector%Recombinant%adenovirus%Glioma
目的 通过构建一种新型腺病毒载体,验证肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL基因)治疗胶质瘤的疗效,并证实新型载体的优势.方法 经美国华盛顿大学实验室授权获得Ad/35△E1-△E3,即E1和E3缺失的5型腺病毒纤维fiber被35型新型载体.利用基因重组,构建出重组腺病毒质粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL.氯化铯密度梯度离心纯化Ad5/35△E1-△E3-TRAIL,并并测定病毒滴度.采用逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光技术、蛋白质印迹法(Western blot)分别检测目的基因的表达.结果 纯化后Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的病毒滴度为1.22×1015 pfu/l.重组质粒经RT-PCR都扩增出104 bp的基因片段.通过免疫荧光和Western blot等方法检测到目的基因的高效表达.结论 新型腺病毒载体质粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL能够高效的在脑胶质瘤细胞中表达.
目的 通過構建一種新型腺病毒載體,驗證腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL基因)治療膠質瘤的療效,併證實新型載體的優勢.方法 經美國華盛頓大學實驗室授權穫得Ad/35△E1-△E3,即E1和E3缺失的5型腺病毒纖維fiber被35型新型載體.利用基因重組,構建齣重組腺病毒質粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL.氯化銫密度梯度離心純化Ad5/35△E1-△E3-TRAIL,併併測定病毒滴度.採用逆轉錄酶-多聚酶鏈反應(RT-PCR)、免疫熒光技術、蛋白質印跡法(Western blot)分彆檢測目的基因的錶達.結果 純化後Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的病毒滴度為1.22×1015 pfu/l.重組質粒經RT-PCR都擴增齣104 bp的基因片段.通過免疫熒光和Western blot等方法檢測到目的基因的高效錶達.結論 新型腺病毒載體質粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL能夠高效的在腦膠質瘤細胞中錶達.
목적 통과구건일충신형선병독재체,험증종류배사인자상관조망유도배체(TRAIL기인)치료효질류적료효,병증실신형재체적우세.방법 경미국화성돈대학실험실수권획득Ad/35△E1-△E3,즉E1화E3결실적5형선병독섬유fiber피35형신형재체.이용기인중조,구건출중조선병독질립Ad5/35△E1-△E3-TRAIL.록화색밀도제도리심순화Ad5/35△E1-△E3-TRAIL,병병측정병독적도.채용역전록매-다취매련반응(RT-PCR)、면역형광기술、단백질인적법(Western blot)분별검측목적기인적표체.결과 순화후Ad5/35△E1-△E3-TRAIL적병독적도위1.22×1015 pfu/l.중조질립경RT-PCR도확증출104 bp적기인편단.통과면역형광화Western blot등방법검측도목적기인적고효표체.결론 신형선병독재체질립Ad5/35△E1-△E3-TRAIL능구고효적재뇌효질류세포중표체.
