临床与实验病理学杂志
臨床與實驗病理學雜誌
림상여실험병이학잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL PATHOLOGY
2014年
6期
599-604
,共6页
吴淑华%何双%胡金龙%温菲菲%孙晨博%田东
吳淑華%何雙%鬍金龍%溫菲菲%孫晨博%田東
오숙화%하쌍%호금룡%온비비%손신박%전동
结肠肿瘤%自噬%RNA干扰%增殖%凋亡%Beclin 1%HCT116
結腸腫瘤%自噬%RNA榦擾%增殖%凋亡%Beclin 1%HCT116
결장종류%자서%RNA간우%증식%조망%Beclin 1%HCT116
colon%neoplasms%autophagy%RNA%interference%proliferation%apoptosis%Beclin%1%HCT116
目的 应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对mTOR、ULK1、LC3-B的表达以及对HCT116细胞株增殖与凋亡的影响.方法 设计4条针对Beclin 1基因的干扰RNA表达载体及阴性对照载体分别瞬时转染HCT116细胞.采用RT-PCR及Western blot法筛选出1条抑制率最高的Beclin 1干扰序列后,瞬时转染HCT116细胞,检测mTOR、ULK1及LC3-B的mRNA及蛋白表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 (1)转染细胞后,BECN1-1245组mRNA及蛋白抑制率最高,达80％.(2)RT-PCR结果显示,BECN1-1245组转染细胞48 h后,与阴性对照组相比,ULK1与LC3-B mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P≤0.05),mTOR在两组中的表达无差异(P＞0.05),Western blot法检测结果与之相同.(3)CCK-8细胞增殖实验显示,BECN1-1245组转染24、48、72 h后,细胞生存率较阴性对照组明显降低(P≤0.05).(4)流式细胞仪检测结果显示,BECN1-1245组转染48 h后,与阴性对照组细胞相比,细胞凋亡率明显升高(P≤0.05).结论 Beclin 1在HCT116细胞自噬中发挥重要的调控作用,抑制Beclin 1的表达,可抑制细胞的自噬活性,并能抑制细胞增殖,促进其凋亡,推测Beclin 1基因可作为结肠癌治疗的新靶点.
目的 應用RNA榦擾(RNA interference,RNAi)技術抑製自噬調控基因Beclin 1的錶達,檢測Beclin 1錶達對mTOR、ULK1、LC3-B的錶達以及對HCT116細胞株增殖與凋亡的影響.方法 設計4條針對Beclin 1基因的榦擾RNA錶達載體及陰性對照載體分彆瞬時轉染HCT116細胞.採用RT-PCR及Western blot法篩選齣1條抑製率最高的Beclin 1榦擾序列後,瞬時轉染HCT116細胞,檢測mTOR、ULK1及LC3-B的mRNA及蛋白錶達,CCK-8實驗檢測細胞增殖活性,流式細胞儀檢測細胞凋亡情況.結果 (1)轉染細胞後,BECN1-1245組mRNA及蛋白抑製率最高,達80％.(2)RT-PCR結果顯示,BECN1-1245組轉染細胞48 h後,與陰性對照組相比,ULK1與LC3-B mRNA錶達水平降低,差異有統計學意義(P≤0.05),mTOR在兩組中的錶達無差異(P＞0.05),Western blot法檢測結果與之相同.(3)CCK-8細胞增殖實驗顯示,BECN1-1245組轉染24、48、72 h後,細胞生存率較陰性對照組明顯降低(P≤0.05).(4)流式細胞儀檢測結果顯示,BECN1-1245組轉染48 h後,與陰性對照組細胞相比,細胞凋亡率明顯升高(P≤0.05).結論 Beclin 1在HCT116細胞自噬中髮揮重要的調控作用,抑製Beclin 1的錶達,可抑製細胞的自噬活性,併能抑製細胞增殖,促進其凋亡,推測Beclin 1基因可作為結腸癌治療的新靶點.
목적 응용RNA간우(RNA interference,RNAi)기술억제자서조공기인Beclin 1적표체,검측Beclin 1표체대mTOR、ULK1、LC3-B적표체이급대HCT116세포주증식여조망적영향.방법 설계4조침대Beclin 1기인적간우RNA표체재체급음성대조재체분별순시전염HCT116세포.채용RT-PCR급Western blot법사선출1조억제솔최고적Beclin 1간우서렬후,순시전염HCT116세포,검측mTOR、ULK1급LC3-B적mRNA급단백표체,CCK-8실험검측세포증식활성,류식세포의검측세포조망정황.결과 (1)전염세포후,BECN1-1245조mRNA급단백억제솔최고,체80％.(2)RT-PCR결과현시,BECN1-1245조전염세포48 h후,여음성대조조상비,ULK1여LC3-B mRNA표체수평강저,차이유통계학의의(P≤0.05),mTOR재량조중적표체무차이(P＞0.05),Western blot법검측결과여지상동.(3)CCK-8세포증식실험현시,BECN1-1245조전염24、48、72 h후,세포생존솔교음성대조조명현강저(P≤0.05).(4)류식세포의검측결과현시,BECN1-1245조전염48 h후,여음성대조조세포상비,세포조망솔명현승고(P≤0.05).결론 Beclin 1재HCT116세포자서중발휘중요적조공작용,억제Beclin 1적표체,가억제세포적자서활성,병능억제세포증식,촉진기조망,추측Beclin 1기인가작위결장암치료적신파점.
