中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2013年
3期
352-356
,共5页
二甲双胍%葡萄糖-6-磷酸酶%蛋白激酶类%分子作用机制
二甲雙胍%葡萄糖-6-燐痠酶%蛋白激酶類%分子作用機製
이갑쌍고%포도당-6-린산매%단백격매류%분자작용궤제
metformin%glucose-6-phosphatase%protein kinases%molecular mechanisms of action
目的 探讨二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶(G6 Pase)基因表达作用及其分子机制.方法 应用稳定表达G6Pase的鼠肝细胞瘤H4 ⅡE M1.3细胞,一组细胞分别给予二甲双胍0.1 ～5.0 mmol·L-1孵育16 h；另一组细胞先加入化合物C 20 μmol·L-1,Bay11-7085 5 μmol· L-1或雷帕霉素25 nmol· L-1作用30 min后,再加入二甲双胍2 mmol· L-1共育16h,采用荧光素酶报告基因检测方法测定G6Pase基因表达水平；细胞加入化合物C 20 μmol· L-1作用30 min后,再分别加入二甲双胍2 mmol·L-1、5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)1 mmol·L-1孵育15 min,Western印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达及其磷酸化水平；细胞加入二甲双胍2 mmol· L-1和胰岛素1 μmol·L-1作用15 min,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)蛋白表达及其磷酸化水平.结果 二甲双胍0.5,1,2和5 mmol·L-1作用16h可以显著抑制G6Pase基因表达(P＜0.05,P＜0.01),二甲双胍0.5和5 mmol·L-1时,分别抑制G6Pase基因表达26％ (P＜0.05)和85％ (P＜0.01).AMPK抑制剂化合物C可部分逆转二甲双胍的抑制作用(P＜0.05)；二甲双胍可诱导AMPK磷酸化,与AICAR作用相似,但这一作用可被化合物C抑制.结论 二甲双胍抑制G6Pase基因表达,其作用机制可能与激活AMPK有关,而可能与Akt,雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及核因子-κB(NF-κB)介导的通路无关.
目的 探討二甲雙胍對葡萄糖-6-燐痠酶(G6 Pase)基因錶達作用及其分子機製.方法 應用穩定錶達G6Pase的鼠肝細胞瘤H4 ⅡE M1.3細胞,一組細胞分彆給予二甲雙胍0.1 ～5.0 mmol·L-1孵育16 h；另一組細胞先加入化閤物C 20 μmol·L-1,Bay11-7085 5 μmol· L-1或雷帕黴素25 nmol· L-1作用30 min後,再加入二甲雙胍2 mmol· L-1共育16h,採用熒光素酶報告基因檢測方法測定G6Pase基因錶達水平；細胞加入化閤物C 20 μmol· L-1作用30 min後,再分彆加入二甲雙胍2 mmol·L-1、5-氨基-4-甲酰胺咪唑覈糖覈苷痠(AICAR)1 mmol·L-1孵育15 min,Western印跡法檢測腺苷痠活化蛋白激酶(AMPK)蛋白錶達及其燐痠化水平；細胞加入二甲雙胍2 mmol· L-1和胰島素1 μmol·L-1作用15 min,Western印跡法檢測蛋白激酶B(Akt)蛋白錶達及其燐痠化水平.結果 二甲雙胍0.5,1,2和5 mmol·L-1作用16h可以顯著抑製G6Pase基因錶達(P＜0.05,P＜0.01),二甲雙胍0.5和5 mmol·L-1時,分彆抑製G6Pase基因錶達26％ (P＜0.05)和85％ (P＜0.01).AMPK抑製劑化閤物C可部分逆轉二甲雙胍的抑製作用(P＜0.05)；二甲雙胍可誘導AMPK燐痠化,與AICAR作用相似,但這一作用可被化閤物C抑製.結論 二甲雙胍抑製G6Pase基因錶達,其作用機製可能與激活AMPK有關,而可能與Akt,雷帕黴素靶蛋白(mTOR)及覈因子-κB(NF-κB)介導的通路無關.
목적 탐토이갑쌍고대포도당-6-린산매(G6 Pase)기인표체작용급기분자궤제.방법 응용은정표체G6Pase적서간세포류H4 ⅡE M1.3세포,일조세포분별급여이갑쌍고0.1 ～5.0 mmol·L-1부육16 h；령일조세포선가입화합물C 20 μmol·L-1,Bay11-7085 5 μmol· L-1혹뢰파매소25 nmol· L-1작용30 min후,재가입이갑쌍고2 mmol· L-1공육16h,채용형광소매보고기인검측방법측정G6Pase기인표체수평；세포가입화합물C 20 μmol· L-1작용30 min후,재분별가입이갑쌍고2 mmol·L-1、5-안기-4-갑선알미서핵당핵감산(AICAR)1 mmol·L-1부육15 min,Western인적법검측선감산활화단백격매(AMPK)단백표체급기린산화수평；세포가입이갑쌍고2 mmol· L-1화이도소1 μmol·L-1작용15 min,Western인적법검측단백격매B(Akt)단백표체급기린산화수평.결과 이갑쌍고0.5,1,2화5 mmol·L-1작용16h가이현저억제G6Pase기인표체(P＜0.05,P＜0.01),이갑쌍고0.5화5 mmol·L-1시,분별억제G6Pase기인표체26％ (P＜0.05)화85％ (P＜0.01).AMPK억제제화합물C가부분역전이갑쌍고적억제작용(P＜0.05)；이갑쌍고가유도AMPK린산화,여AICAR작용상사,단저일작용가피화합물C억제.결론 이갑쌍고억제G6Pase기인표체,기작용궤제가능여격활AMPK유관,이가능여Akt,뢰파매소파단백(mTOR)급핵인자-κB(NF-κB)개도적통로무관.
