江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2013年
4期
277-283
,共7页
胡君%叶荣%王春燕%崔恒进%徐晓静%张焕相
鬍君%葉榮%王春燕%崔恆進%徐曉靜%張煥相
호군%협영%왕춘연%최항진%서효정%장환상
T细胞因子4%腺病毒载体%间充质于细胞%细胞迁移
T細胞因子4%腺病毒載體%間充質于細胞%細胞遷移
T세포인자4%선병독재체%간충질우세포%세포천이
TCF4%adenovirus vector%mesenchymal stem cells%cell migration
目的:构建腺病毒表达载体Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4(缺失了β-catenin结合位点),并初步鉴定其在间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达,为进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在MSCs中的功能以及应用MSCs进行干细胞移植和基因治疗奠定基础.方法:以MSCs的cDNA为模板,扩增TCF4和ΔTCF4基因,将基因序列定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV后,转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得重组腺病毒载体Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4.PCR以及Pac Ⅰ酶切鉴定后,Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4转染QBI-293A进行包装和扩增.检测重组载体的病毒滴度以及感染MSCs的最适病毒复数(multiplicity of infection,MOI),并探讨Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4在MSCs中的表达以及对迁移的影响.结果:成功构建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,病毒滴度分别为1.1×107 pfu/mL和1.3×107 pfu/mL,150 MOI病毒感染MSCs的效率达到90％以上;蛋白质印迹和TOPFlash/FOPFlash报告基因检测显示TCF4在MSCs中表达增加,并具有调节下游靶基因转录的活性;Boyden小室迁移实验发现感染Ad-ΔTCF4能显著抑制MSCs向LiCl的迁移能力,而感染Ad-TCF4并不能提高MSCs的迁移能力.结论:成功构建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,能高效感染MSCs并正确表达.
目的:構建腺病毒錶達載體Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4(缺失瞭β-catenin結閤位點),併初步鑒定其在間充質榦細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的錶達,為進一步研究Wnt/β-catenin信號通路在MSCs中的功能以及應用MSCs進行榦細胞移植和基因治療奠定基礎.方法:以MSCs的cDNA為模闆,擴增TCF4和ΔTCF4基因,將基因序列定嚮剋隆至穿梭質粒載體pShuttle-CMV後,轉化含pAdEasy-1的BJ5183感受態細胞進行同源重組,穫得重組腺病毒載體Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4.PCR以及Pac Ⅰ酶切鑒定後,Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4轉染QBI-293A進行包裝和擴增.檢測重組載體的病毒滴度以及感染MSCs的最適病毒複數(multiplicity of infection,MOI),併探討Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4在MSCs中的錶達以及對遷移的影響.結果:成功構建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,病毒滴度分彆為1.1×107 pfu/mL和1.3×107 pfu/mL,150 MOI病毒感染MSCs的效率達到90％以上;蛋白質印跡和TOPFlash/FOPFlash報告基因檢測顯示TCF4在MSCs中錶達增加,併具有調節下遊靶基因轉錄的活性;Boyden小室遷移實驗髮現感染Ad-ΔTCF4能顯著抑製MSCs嚮LiCl的遷移能力,而感染Ad-TCF4併不能提高MSCs的遷移能力.結論:成功構建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,能高效感染MSCs併正確錶達.
목적:구건선병독표체재체Ad-TCF4화Ad-ΔTCF4(결실료β-catenin결합위점),병초보감정기재간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSCs)중적표체,위진일보연구Wnt/β-catenin신호통로재MSCs중적공능이급응용MSCs진행간세포이식화기인치료전정기출.방법:이MSCs적cDNA위모판,확증TCF4화ΔTCF4기인,장기인서렬정향극륭지천사질립재체pShuttle-CMV후,전화함pAdEasy-1적BJ5183감수태세포진행동원중조,획득중조선병독재체Ad-TCF4화Ad-ΔTCF4.PCR이급Pac Ⅰ매절감정후,Ad-TCF4화Ad-ΔTCF4전염QBI-293A진행포장화확증.검측중조재체적병독적도이급감염MSCs적최괄병독복수(multiplicity of infection,MOI),병탐토Ad-TCF4화Ad-ΔTCF4재MSCs중적표체이급대천이적영향.결과:성공구건Ad-TCF4화Ad-ΔTCF4,병독적도분별위1.1×107 pfu/mL화1.3×107 pfu/mL,150 MOI병독감염MSCs적효솔체도90％이상;단백질인적화TOPFlash/FOPFlash보고기인검측현시TCF4재MSCs중표체증가,병구유조절하유파기인전록적활성;Boyden소실천이실험발현감염Ad-ΔTCF4능현저억제MSCs향LiCl적천이능력,이감염Ad-TCF4병불능제고MSCs적천이능력.결론:성공구건Ad-TCF4화Ad-ΔTCF4,능고효감염MSCs병정학표체.
