食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
13期
151-155
,共5页
郭松佳%单树花%晋小婷%李宗伟%宋莉%李卓玉
郭鬆佳%單樹花%晉小婷%李宗偉%宋莉%李卓玉
곽송가%단수화%진소정%리종위%송리%리탁옥
地皮菜%重组水应激蛋白%表达与纯化%结肠癌%细胞凋亡
地皮菜%重組水應激蛋白%錶達與純化%結腸癌%細胞凋亡
지피채%중조수응격단백%표체여순화%결장암%세포조망
Nostoc%commune%Vauch.%recombinant%water%stress%protein%1%(Re-WSP1)%expression%and%purification%colon%cancer%cell%apoptosis
利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出地皮菜(Nostoc commune Vauch.)一种新型水应激蛋白(water stress protein,WSP)的基因(GenBank序列号:KF003026),连接到原核表达载体pET28a上,测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21,获得一种新型水应激蛋白表达工程菌;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达及镍离子亲和层析柱(Ni-NTA)纯化后,得到了带6×His 标签、分子质量大小为40 kD的可溶性目的蛋白,称其为重组水应激蛋白1(recombinant water stress protein 1,Re-WSP1).细胞增殖抑制实验结果表明,Re-WSP1蛋白可以抑制结肠癌细胞SW480的增殖,而对正常结肠上皮FHC细胞无明显作用;DAPI细胞核染色结果表明,该蛋白能够诱导SW480细胞凋亡小体的形成;Western blotting结果显示,Re-WSP1蛋白能够促进Procaspase-3和Procaspase-8的活化剪切.以上结果表明:Re-WSP1蛋白能够明显的抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并可能通过Caspase依赖途径诱导SW480细胞凋亡.
利用聚閤酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)擴增齣地皮菜(Nostoc commune Vauch.)一種新型水應激蛋白(water stress protein,WSP)的基因(GenBank序列號:KF003026),連接到原覈錶達載體pET28a上,測序鑒定後轉化入大腸桿菌BL21,穫得一種新型水應激蛋白錶達工程菌;經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)誘導錶達及鎳離子親和層析柱(Ni-NTA)純化後,得到瞭帶6×His 標籤、分子質量大小為40 kD的可溶性目的蛋白,稱其為重組水應激蛋白1(recombinant water stress protein 1,Re-WSP1).細胞增殖抑製實驗結果錶明,Re-WSP1蛋白可以抑製結腸癌細胞SW480的增殖,而對正常結腸上皮FHC細胞無明顯作用;DAPI細胞覈染色結果錶明,該蛋白能夠誘導SW480細胞凋亡小體的形成;Western blotting結果顯示,Re-WSP1蛋白能夠促進Procaspase-3和Procaspase-8的活化剪切.以上結果錶明:Re-WSP1蛋白能夠明顯的抑製結腸癌SW480細胞的增殖,併可能通過Caspase依賴途徑誘導SW480細胞凋亡.
이용취합매련식반응(polymerase chain reaction,PCR)확증출지피채(Nostoc commune Vauch.)일충신형수응격단백(water stress protein,WSP)적기인(GenBank서렬호:KF003026),련접도원핵표체재체pET28a상,측서감정후전화입대장간균BL21,획득일충신형수응격단백표체공정균;경이병기-β-D-류대반유당감(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)유도표체급얼리자친화층석주(Ni-NTA)순화후,득도료대6×His 표첨、분자질량대소위40 kD적가용성목적단백,칭기위중조수응격단백1(recombinant water stress protein 1,Re-WSP1).세포증식억제실험결과표명,Re-WSP1단백가이억제결장암세포SW480적증식,이대정상결장상피FHC세포무명현작용;DAPI세포핵염색결과표명,해단백능구유도SW480세포조망소체적형성;Western blotting결과현시,Re-WSP1단백능구촉진Procaspase-3화Procaspase-8적활화전절.이상결과표명:Re-WSP1단백능구명현적억제결장암SW480세포적증식,병가능통과Caspase의뢰도경유도SW480세포조망.
