食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
13期
37-42
,共6页
刘玲%蒋然然%彭海鑫%李艳芳%任阳阳%肖安蓬%陈海%李树红
劉玲%蔣然然%彭海鑫%李豔芳%任暘暘%肖安蓬%陳海%李樹紅
류령%장연연%팽해흠%리염방%임양양%초안봉%진해%리수홍
鲢鱼卵%半胱氨酸蛋白酶抑制因子%纯化%鉴定%鱼糜凝胶强度
鰱魚卵%半胱氨痠蛋白酶抑製因子%純化%鑒定%魚糜凝膠彊度
련어란%반광안산단백매억제인자%순화%감정%어미응효강도
silver%carp%eggs%cysteine%protease%inhibitors%purification%characterization%surimi%gel%strength
通过比较鲢鱼卵半胱氨酸蛋白酶抑制因子(cysteine proteinase inhibitors,CPIs)粗提过程中的比活力(Azocasein法),确定其最佳粗提条件为:以含0.1 mmol/L苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)的20 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.0)作为匀浆缓冲液,并于30℃对匀浆样进行pH 3.0酸处理10 min,然后碱回调至pH 8.0,CPIs纯度提高了15.54倍.进一步经SP Sepharose Fast Flow阳离子层析验证表明,与pH 4.0相比,pH 3.0酸处理能高效除去活性峰Ⅱ中的酸碱及热不稳定杂蛋白,使CPIs比活力提高了48.22倍.采用SephacrylS-200分子筛层析,获得部分纯化的低分子CPIs组分Ⅱ-b和Ⅱ-c,比活力和纯化倍数分别为1 098.59 U/mg、312.10倍和1 769.23 U/mg、502.62倍.电泳分析表明,明胶底物-SDS-反相酶谱法无法鉴定Ⅱ-b和Ⅱ-c的抑制活性;而与木瓜蛋白酶在适宜条件下反应后进行的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)则初步鉴定Ⅱ-b和Ⅱ-c中均含有至少7 kD和10 kD两种低分子CPIs.最后经质构分析表明,Ⅱ-b和Ⅱ-c以5 U/g添加入鲢鱼鱼糜时,均能够极显著提高鲢鱼鱼糜凝胶强度(48.77％和55.55％),抑制软化.
通過比較鰱魚卵半胱氨痠蛋白酶抑製因子(cysteine proteinase inhibitors,CPIs)粗提過程中的比活力(Azocasein法),確定其最佳粗提條件為:以含0.1 mmol/L苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)的20 mmol/L燐痠鹽緩遲液(pH 6.0)作為勻漿緩遲液,併于30℃對勻漿樣進行pH 3.0痠處理10 min,然後堿迴調至pH 8.0,CPIs純度提高瞭15.54倍.進一步經SP Sepharose Fast Flow暘離子層析驗證錶明,與pH 4.0相比,pH 3.0痠處理能高效除去活性峰Ⅱ中的痠堿及熱不穩定雜蛋白,使CPIs比活力提高瞭48.22倍.採用SephacrylS-200分子篩層析,穫得部分純化的低分子CPIs組分Ⅱ-b和Ⅱ-c,比活力和純化倍數分彆為1 098.59 U/mg、312.10倍和1 769.23 U/mg、502.62倍.電泳分析錶明,明膠底物-SDS-反相酶譜法無法鑒定Ⅱ-b和Ⅱ-c的抑製活性;而與木瓜蛋白酶在適宜條件下反應後進行的十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)則初步鑒定Ⅱ-b和Ⅱ-c中均含有至少7 kD和10 kD兩種低分子CPIs.最後經質構分析錶明,Ⅱ-b和Ⅱ-c以5 U/g添加入鰱魚魚糜時,均能夠極顯著提高鰱魚魚糜凝膠彊度(48.77％和55.55％),抑製軟化.
통과비교련어란반광안산단백매억제인자(cysteine proteinase inhibitors,CPIs)조제과정중적비활력(Azocasein법),학정기최가조제조건위:이함0.1 mmol/L분갑기광선불(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)적20 mmol/L린산염완충액(pH 6.0)작위균장완충액,병우30℃대균장양진행pH 3.0산처리10 min,연후감회조지pH 8.0,CPIs순도제고료15.54배.진일보경SP Sepharose Fast Flow양리자층석험증표명,여pH 4.0상비,pH 3.0산처리능고효제거활성봉Ⅱ중적산감급열불은정잡단백,사CPIs비활력제고료48.22배.채용SephacrylS-200분자사층석,획득부분순화적저분자CPIs조분Ⅱ-b화Ⅱ-c,비활력화순화배수분별위1 098.59 U/mg、312.10배화1 769.23 U/mg、502.62배.전영분석표명,명효저물-SDS-반상매보법무법감정Ⅱ-b화Ⅱ-c적억제활성;이여목과단백매재괄의조건하반응후진행적십이완기류산납-취병희선알응효전영(sodium dodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)칙초보감정Ⅱ-b화Ⅱ-c중균함유지소7 kD화10 kD량충저분자CPIs.최후경질구분석표명,Ⅱ-b화Ⅱ-c이5 U/g첨가입련어어미시,균능구겁현저제고련어어미응효강도(48.77％화55.55％),억제연화.
