郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2013年
4期
477-480
,共4页
白细胞介素-10%腺病毒载体%大鼠%肝细胞%保护作用
白細胞介素-10%腺病毒載體%大鼠%肝細胞%保護作用
백세포개소-10%선병독재체%대서%간세포%보호작용
interleukin-10%adenovirus vector%rat%hepatocyte%protection effect
目的：构建携带人白细胞介素-10（hIL-10）基因的腺病毒载体，并验证其对大鼠肝细胞损伤的保护作用。方法：以pORF-hIL-10质粒为模板， PCR 扩增 hIL-10，插入腺病毒质粒 pDC315，构建 pDC315-hIL-10。将pDC315-hIL-10质粒与腺病毒包装质粒共转染293细胞，产生复制缺陷型重组腺病毒Ad5-hIL-10；感染大鼠肝细胞，免疫学方法鉴定目的基因的表达；建立CCL4诱导的大鼠肝细胞损伤模型，观察Ad5-hIL-10不同感染强度（ MOI）预处理对损伤肝细胞存活率的影响。结果：经PCR扩增，证明已正确构建重组腺病毒Ad5-hIL-10。大鼠肝细胞感染Ad5-hIL-10后，随着病毒MOI的升高，hIL-10表达上升（F＝52．667，P＜0．001）。不同感染强度（ MOI＝1、5、10和50） Ad5-hIL-10预处理组大鼠肝细胞存活率较损伤对照组升高，差异有统计学意义（F＝23．645、22．533、30．697、35．559，P均＜0．001）。结论：成功构建了重组腺病毒 Ad5-hIL-10，其能提高肝细胞的存活能力，对肝细胞有保护作用。
目的：構建攜帶人白細胞介素-10（hIL-10）基因的腺病毒載體，併驗證其對大鼠肝細胞損傷的保護作用。方法：以pORF-hIL-10質粒為模闆， PCR 擴增 hIL-10，插入腺病毒質粒 pDC315，構建 pDC315-hIL-10。將pDC315-hIL-10質粒與腺病毒包裝質粒共轉染293細胞，產生複製缺陷型重組腺病毒Ad5-hIL-10；感染大鼠肝細胞，免疫學方法鑒定目的基因的錶達；建立CCL4誘導的大鼠肝細胞損傷模型，觀察Ad5-hIL-10不同感染彊度（ MOI）預處理對損傷肝細胞存活率的影響。結果：經PCR擴增，證明已正確構建重組腺病毒Ad5-hIL-10。大鼠肝細胞感染Ad5-hIL-10後，隨著病毒MOI的升高，hIL-10錶達上升（F＝52．667，P＜0．001）。不同感染彊度（ MOI＝1、5、10和50） Ad5-hIL-10預處理組大鼠肝細胞存活率較損傷對照組升高，差異有統計學意義（F＝23．645、22．533、30．697、35．559，P均＜0．001）。結論：成功構建瞭重組腺病毒 Ad5-hIL-10，其能提高肝細胞的存活能力，對肝細胞有保護作用。
목적：구건휴대인백세포개소-10（hIL-10）기인적선병독재체，병험증기대대서간세포손상적보호작용。방법：이pORF-hIL-10질립위모판， PCR 확증 hIL-10，삽입선병독질립 pDC315，구건 pDC315-hIL-10。장pDC315-hIL-10질립여선병독포장질립공전염293세포，산생복제결함형중조선병독Ad5-hIL-10；감염대서간세포，면역학방법감정목적기인적표체；건립CCL4유도적대서간세포손상모형，관찰Ad5-hIL-10불동감염강도（ MOI）예처리대손상간세포존활솔적영향。결과：경PCR확증，증명이정학구건중조선병독Ad5-hIL-10。대서간세포감염Ad5-hIL-10후，수착병독MOI적승고，hIL-10표체상승（F＝52．667，P＜0．001）。불동감염강도（ MOI＝1、5、10화50） Ad5-hIL-10예처리조대서간세포존활솔교손상대조조승고，차이유통계학의의（F＝23．645、22．533、30．697、35．559，P균＜0．001）。결론：성공구건료중조선병독 Ad5-hIL-10，기능제고간세포적존활능력，대간세포유보호작용。
Aim:To construct the adenovirus vector carrying human interleukin-10 (hIL-10) gene, and then identify the expression of hIL-10 and detect its protection effects on rat hepatocytes during liver injury .Methods:The hIL-10 gene was amplified by PCR from template plasmid pORF-hIL-10, then digested with endonuclease and inserted into pDC 315 to construct pDC315-hIL-10.The plasmid pDC315-hIL-10 and the adenovirus vector were cotransfected to 293 cells togenerate the replication-deficient recombinant adenovirus Ad 5-hIL-10.Ad5-hIL-10 was used to infect rat hepatocytes and the expres-sion of hIL-10 was identified by immunology method .Rat hepatocyte injury model was constructed , and the protection effects of Ad5-hIL-10 was investigated in rat model at different multiplicities of infection (MOI).Results: The recombi-nant adenovirus Ad5-hIL-10 was recombined successfully .Rat hepatocytes expressed hIL-10 after infection of Ad5-hIL-10. The expression level of hIL-10 was increased along with the increase of MOI (F=52.667,P<0.001).Cell viability of rat hepatocytes in Ad5-hIL-10-treated group(MOI=1,5,10 and 50) was higher than that in the control group ,the difference has a statistical significance(F=23.645,22.533,30.697,35.559,P<0.001).Conclusion:The recombinant adenovirus Ad5-hIL-10 has been successfully constructed , which could improve hepatocytes viability and protect hepatocytes .
