解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2014年
2期
204-210
,共7页
微小RNA%胰十二指肠同源异型盒基因-1%胰岛素分泌细胞%实时定量聚合酶链反应%小鼠
微小RNA%胰十二指腸同源異型盒基因-1%胰島素分泌細胞%實時定量聚閤酶鏈反應%小鼠
미소RNA%이십이지장동원이형합기인-1%이도소분비세포%실시정량취합매련반응%소서
miRNA%Pancreatic homeobox gene-1%Insulin-producing cells%Real-time PCR%Mouse
目的 实现小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化并对分化过程中可能调控胰十二指肠同源异型盒基因-1(PDX-1)基因表达miRNAs进行鉴定.方法 首先分离培养BMSCs,应用conophylline和尼克酰胺将其诱导分化为IPCs,采用双硫腙(DTZ)染色和免疫荧光检测胰岛素的表达.然后采用靶基因预测软件miRanda和Target Scan对调控PDX-1基因表达miRNAs进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测诱导分化过程中miRNAs及PDX-1的表达.结果 诱导分化后的细胞双硫腙染色呈猩红色,免疫荧光化学显示有胰岛素表达.生物信息学方法预测得到4个可能调控PDX-1表达的miRNAs,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现其中的miR-149和miR-346能结合到PDX-1 mRNA的3'UTR并有效抑制其表达.Real-time PCR检测结果表明,miR-149和miR-346的表达水平与PDX-1表达呈负相关.结论 miR-149和miR-346能负性调控IPCs诱导分化过程中PDX-1的表达.
目的 實現小鼠骨髓間充質榦細胞(BMSCs)嚮胰島素分泌細胞(IPCs)的誘導分化併對分化過程中可能調控胰十二指腸同源異型盒基因-1(PDX-1)基因錶達miRNAs進行鑒定.方法 首先分離培養BMSCs,應用conophylline和尼剋酰胺將其誘導分化為IPCs,採用雙硫腙(DTZ)染色和免疫熒光檢測胰島素的錶達.然後採用靶基因預測軟件miRanda和Target Scan對調控PDX-1基因錶達miRNAs進行預測併通過雙熒光素酶報告基因繫統鑒定.實時定量聚閤酶鏈反應(Real-time PCR)檢測誘導分化過程中miRNAs及PDX-1的錶達.結果 誘導分化後的細胞雙硫腙染色呈猩紅色,免疫熒光化學顯示有胰島素錶達.生物信息學方法預測得到4箇可能調控PDX-1錶達的miRNAs,通過雙熒光素酶報告基因繫統檢測髮現其中的miR-149和miR-346能結閤到PDX-1 mRNA的3'UTR併有效抑製其錶達.Real-time PCR檢測結果錶明,miR-149和miR-346的錶達水平與PDX-1錶達呈負相關.結論 miR-149和miR-346能負性調控IPCs誘導分化過程中PDX-1的錶達.
목적 실현소서골수간충질간세포(BMSCs)향이도소분비세포(IPCs)적유도분화병대분화과정중가능조공이십이지장동원이형합기인-1(PDX-1)기인표체miRNAs진행감정.방법 수선분리배양BMSCs,응용conophylline화니극선알장기유도분화위IPCs,채용쌍류종(DTZ)염색화면역형광검측이도소적표체.연후채용파기인예측연건miRanda화Target Scan대조공PDX-1기인표체miRNAs진행예측병통과쌍형광소매보고기인계통감정.실시정량취합매련반응(Real-time PCR)검측유도분화과정중miRNAs급PDX-1적표체.결과 유도분화후적세포쌍류종염색정성홍색,면역형광화학현시유이도소표체.생물신식학방법예측득도4개가능조공PDX-1표체적miRNAs,통과쌍형광소매보고기인계통검측발현기중적miR-149화miR-346능결합도PDX-1 mRNA적3'UTR병유효억제기표체.Real-time PCR검측결과표명,miR-149화miR-346적표체수평여PDX-1표체정부상관.결론 miR-149화miR-346능부성조공IPCs유도분화과정중PDX-1적표체.
