中国神经免疫学和神经病学杂志
中國神經免疫學和神經病學雜誌
중국신경면역학화신경병학잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY AND
2014年
4期
236-240
,共5页
毕涌%林晓滨%李晓莉%魏鹏%王廷华%张旭%洪娟
畢湧%林曉濱%李曉莉%魏鵬%王廷華%張旭%洪娟
필용%림효빈%리효리%위붕%왕정화%장욱%홍연
帕金森病%骨髓间充质干细胞%绿色荧光蛋白%小鼠%细胞移植
帕金森病%骨髓間充質榦細胞%綠色熒光蛋白%小鼠%細胞移植
파금삼병%골수간충질간세포%록색형광단백%소서%세포이식
Parkinson disease%mesenchymal stem cells%green fluorescent protein%mouse%transgenic%cell transplantation
目的 建立绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)细胞系,探讨MSCs移植对帕金森病(PD)模型大鼠行为学的影响及MSCs在脑组织中的成活及迁移分布情况.方法 通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化GFP转基因小鼠的MSCs,将PD模型大鼠按随机数字法分为MSCs移植组(MSCs组)、DMEM/F12培养液对照组(DMEM/F12组)和PD空白对照组,MSCs组进行纹状体MSCs细胞移植.于MSCs细胞移植术前及术后第2、4和6周,计数阿扑吗啡(APO)诱发下30 min内的平均旋转圈数,动态观察PD模型大鼠行为学变化,并观察移植部位脑组织形态学及MSCs成活和迁移情况.结果 MSCs传代培养后形成形态均一的梭形细胞,呈GFP强阳性表达;MSCs纯度得到提高,与原代培养3d的MSCs比较,传代培养5代后MSCs的CD44、CD54阳性率增高[(95.8±0.8)％ vs.(64.4±2.2)％,(91.4±1.3)％ vs.(63.2±0.5)％,],CD44阳性率减低[(33.6±4.1)％ vs.(2.1％±1.8)％](均P＜0.05).移植术后第2周,MSCs组在APO诱发下30 min内的平均旋转圈数为(9.2±1.8)次/min,较移植术前[(10.8±1.8)次/min]明显减少(P＜0.05),亦低于DMEM/F12组[(10.1±2.1)次/min]和PD空白对照组[(10.8±2.2)次/min](P＜0.05);在移植术后第4周[(5.7±2.1)次/min]和第6周[(6.2±1.9)次/min]平均旋转圈数减少最为明显(均P＜0.05),亦均低于DMEM/F12组U10.6±1.8)、(10.2±1.4)次/min]和PD模型组[(11.1±2.1)、(10.4±1.7)次/min](均P＜0.05);DMEM/F12组和PD空白对照组平均旋转圈数移植术前后比较无明显变化(P＞0.05).荧光染色结果显示,移植细胞在PD模型大鼠脑组织内均能存活,并与大鼠组织产生整合;大鼠脑组织结构无破坏,无胶质瘢痕形成.结论 成功建立了GFP转基因小鼠的MSCs细胞系;MSCs脑内移植能有效改善PD模型大鼠的行为学表现,与宿主组织相容性良好.
目的 建立綠色熒光蛋白(GFP)轉基因小鼠骨髓間充質榦細胞(MSCs)細胞繫,探討MSCs移植對帕金森病(PD)模型大鼠行為學的影響及MSCs在腦組織中的成活及遷移分佈情況.方法 通過全骨髓貼壁法體外分離、培養、純化GFP轉基因小鼠的MSCs,將PD模型大鼠按隨機數字法分為MSCs移植組(MSCs組)、DMEM/F12培養液對照組(DMEM/F12組)和PD空白對照組,MSCs組進行紋狀體MSCs細胞移植.于MSCs細胞移植術前及術後第2、4和6週,計數阿撲嗎啡(APO)誘髮下30 min內的平均鏇轉圈數,動態觀察PD模型大鼠行為學變化,併觀察移植部位腦組織形態學及MSCs成活和遷移情況.結果 MSCs傳代培養後形成形態均一的梭形細胞,呈GFP彊暘性錶達;MSCs純度得到提高,與原代培養3d的MSCs比較,傳代培養5代後MSCs的CD44、CD54暘性率增高[(95.8±0.8)％ vs.(64.4±2.2)％,(91.4±1.3)％ vs.(63.2±0.5)％,],CD44暘性率減低[(33.6±4.1)％ vs.(2.1％±1.8)％](均P＜0.05).移植術後第2週,MSCs組在APO誘髮下30 min內的平均鏇轉圈數為(9.2±1.8)次/min,較移植術前[(10.8±1.8)次/min]明顯減少(P＜0.05),亦低于DMEM/F12組[(10.1±2.1)次/min]和PD空白對照組[(10.8±2.2)次/min](P＜0.05);在移植術後第4週[(5.7±2.1)次/min]和第6週[(6.2±1.9)次/min]平均鏇轉圈數減少最為明顯(均P＜0.05),亦均低于DMEM/F12組U10.6±1.8)、(10.2±1.4)次/min]和PD模型組[(11.1±2.1)、(10.4±1.7)次/min](均P＜0.05);DMEM/F12組和PD空白對照組平均鏇轉圈數移植術前後比較無明顯變化(P＞0.05).熒光染色結果顯示,移植細胞在PD模型大鼠腦組織內均能存活,併與大鼠組織產生整閤;大鼠腦組織結構無破壞,無膠質瘢痕形成.結論 成功建立瞭GFP轉基因小鼠的MSCs細胞繫;MSCs腦內移植能有效改善PD模型大鼠的行為學錶現,與宿主組織相容性良好.
목적 건립록색형광단백(GFP)전기인소서골수간충질간세포(MSCs)세포계,탐토MSCs이식대파금삼병(PD)모형대서행위학적영향급MSCs재뇌조직중적성활급천이분포정황.방법 통과전골수첩벽법체외분리、배양、순화GFP전기인소서적MSCs,장PD모형대서안수궤수자법분위MSCs이식조(MSCs조)、DMEM/F12배양액대조조(DMEM/F12조)화PD공백대조조,MSCs조진행문상체MSCs세포이식.우MSCs세포이식술전급술후제2、4화6주,계수아복마배(APO)유발하30 min내적평균선전권수,동태관찰PD모형대서행위학변화,병관찰이식부위뇌조직형태학급MSCs성활화천이정황.결과 MSCs전대배양후형성형태균일적사형세포,정GFP강양성표체;MSCs순도득도제고,여원대배양3d적MSCs비교,전대배양5대후MSCs적CD44、CD54양성솔증고[(95.8±0.8)％ vs.(64.4±2.2)％,(91.4±1.3)％ vs.(63.2±0.5)％,],CD44양성솔감저[(33.6±4.1)％ vs.(2.1％±1.8)％](균P＜0.05).이식술후제2주,MSCs조재APO유발하30 min내적평균선전권수위(9.2±1.8)차/min,교이식술전[(10.8±1.8)차/min]명현감소(P＜0.05),역저우DMEM/F12조[(10.1±2.1)차/min]화PD공백대조조[(10.8±2.2)차/min](P＜0.05);재이식술후제4주[(5.7±2.1)차/min]화제6주[(6.2±1.9)차/min]평균선전권수감소최위명현(균P＜0.05),역균저우DMEM/F12조U10.6±1.8)、(10.2±1.4)차/min]화PD모형조[(11.1±2.1)、(10.4±1.7)차/min](균P＜0.05);DMEM/F12조화PD공백대조조평균선전권수이식술전후비교무명현변화(P＞0.05).형광염색결과현시,이식세포재PD모형대서뇌조직내균능존활,병여대서조직산생정합;대서뇌조직결구무파배,무효질반흔형성.결론 성공건립료GFP전기인소서적MSCs세포계;MSCs뇌내이식능유효개선PD모형대서적행위학표현,여숙주조직상용성량호.
