CAJ | 학술논문

[目的]构建和表达登革病毒4型病毒样颗粒,初步研究其免疫学特性.[方法]用RT-PCR法扩增DENV4-prM/E基因,构建重组质粒pGAPZ-sprM/E-D4,转化X33酵母菌株,SDS-PAGE、Western Blot鉴定目的蛋白表达.切片电镜检测病毒样颗粒,蔗糖密度梯度离心纯化.免疫三组Balb/C小鼠,每组15只.采用间接ELISA检测抗原特异性抗体,间接免疫荧光法检测免疫血清与天然病毒粒子的结合,流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞表型,酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测脾分泌IFN-γ、TNF-α和IL-10的细胞.[结果]重组质粒在酵母中以病毒样颗粒形式表达,为直径20～ 30hm的球形颗粒,VLP免疫组刺激小鼠产生抗体与灭活病毒组相似,流式及ELISPOT结果提示DENV4-VLP与灭活病毒组相似,用登革病毒抗原刺激后,分泌IFN-γ,TNF-α的细胞数目明显增加,各组分泌IL-10细胞数目的整体水平均不高.[结论]应用毕赤酵母表达系统成功表达获得了DENV4-VLP,具有良好的免疫原性,可诱导Balb/C小鼠产生有效的体液免疫应答,并能诱导Th1型免疫应答而诱导Th2型免疫应答较弱.
[목적]구건화표체등혁병독4형병독양과립,초보연구기면역학특성.[방법]용RT-PCR법확증DENV4-prM/E기인,구건중조질립pGAPZ-sprM/E-D4,전화X33효모균주,SDS-PAGE、Western Blot감정목적단백표체.절편전경검측병독양과립,자당밀도제도리심순화.면역삼조Balb/C소서,매조15지.채용간접ELISA검측항원특이성항체,간접면역형광법검측면역혈청여천연병독입자적결합,류식세포술분석소서비림파세포표형,매련면역반점법(ELISPOT)검측비분비IFN-γ、TNF-α화IL-10적세포.[결과]중조질립재효모중이병독양과립형식표체,위직경20～ 30hm적구형과립,VLP면역조자격소서산생항체여멸활병독조상사,류식급ELISPOT결과제시DENV4-VLP여멸활병독조상사,용등혁병독항원자격후,분비IFN-γ,TNF-α적세포수목명현증가,각조분비IL-10세포수목적정체수평균불고.[결론]응용필적효모표체계통성공표체획득료DENV4-VLP,구유량호적면역원성,가유도Balb/C소서산생유효적체액면역응답,병능유도Th1형면역응답이유도Th2형면역응답교약.