天津理工大学学报
天津理工大學學報
천진리공대학학보
JOURNAL OF TIANJIN UNIVERSITY OF TECHNOLOGY
2013年
4期
51-56
,共6页
耐热纤维素酶%离子层析%纯化工艺%酶学性质
耐熱纖維素酶%離子層析%純化工藝%酶學性質
내열섬유소매%리자층석%순화공예%매학성질
hyperthermophilic cellulose%ion-exchange chromatography%purification%enzymatic properties
耐热纤维素酶具有广泛的应用前景,本研究室在利.用大肠杆菌表达来自Pyrococcus horikoshii的极端耐热β-1,4-内切纤维素酶基础上,建立了包括热处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子层析的纯化工艺,分离纯化获得单一组分的重组极端耐热β-1,4-内切纤维素酶(EGPh),SDS-PAGE测定该酶纯度大于90％,以CMC-Na为底物,DNS法测定比活22.3 U/mg,活性收率为73.3％,纯化倍数为45倍.酶学性质研究表明,该酶的分子量为43 KD,等电点(PI)为5.3,催化CMC-Na最适反应温度为95℃,最适反应pH为6.0,Km值为3.61 0.26 mg/ml.酶学稳定性研究表明EGPh在pH4.0～ 9.0、温度85℃下稳定.纯化的EGPh表现了极好的热稳定性,95℃时半衰期为8h.
耐熱纖維素酶具有廣汎的應用前景,本研究室在利.用大腸桿菌錶達來自Pyrococcus horikoshii的極耑耐熱β-1,4-內切纖維素酶基礎上,建立瞭包括熱處理、DEAE Sepharose Fast Flow陰離子層析的純化工藝,分離純化穫得單一組分的重組極耑耐熱β-1,4-內切纖維素酶(EGPh),SDS-PAGE測定該酶純度大于90％,以CMC-Na為底物,DNS法測定比活22.3 U/mg,活性收率為73.3％,純化倍數為45倍.酶學性質研究錶明,該酶的分子量為43 KD,等電點(PI)為5.3,催化CMC-Na最適反應溫度為95℃,最適反應pH為6.0,Km值為3.61 0.26 mg/ml.酶學穩定性研究錶明EGPh在pH4.0～ 9.0、溫度85℃下穩定.純化的EGPh錶現瞭極好的熱穩定性,95℃時半衰期為8h.
내열섬유소매구유엄범적응용전경,본연구실재리.용대장간균표체래자Pyrococcus horikoshii적겁단내열β-1,4-내절섬유소매기출상,건립료포괄열처리、DEAE Sepharose Fast Flow음리자층석적순화공예,분리순화획득단일조분적중조겁단내열β-1,4-내절섬유소매(EGPh),SDS-PAGE측정해매순도대우90％,이CMC-Na위저물,DNS법측정비활22.3 U/mg,활성수솔위73.3％,순화배수위45배.매학성질연구표명,해매적분자량위43 KD,등전점(PI)위5.3,최화CMC-Na최괄반응온도위95℃,최괄반응pH위6.0,Km치위3.61 0.26 mg/ml.매학은정성연구표명EGPh재pH4.0～ 9.0、온도85℃하은정.순화적EGPh표현료겁호적열은정성,95℃시반쇠기위8h.
