现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2013年
9期
1905-1910
,共6页
隋承光%杨明花%孟繁东%王帅%孙海燕%刘晓辉%王扬
隋承光%楊明花%孟繁東%王帥%孫海燕%劉曉輝%王颺
수승광%양명화%맹번동%왕수%손해연%류효휘%왕양
树突状细胞%PSMA基因%4-1BBL基因%细胞因子活化杀伤细胞(CIK)
樹突狀細胞%PSMA基因%4-1BBL基因%細胞因子活化殺傷細胞(CIK)
수돌상세포%PSMA기인%4-1BBL기인%세포인자활화살상세포(CIK)
dendritic cell%hPSMA gene%4-1BBL gene%cytokine-induced killer(CIK)
目的:本研究通过复制缺陷性腺病毒介导的人前列腺特异性膜抗原基因(PSMA)和肿瘤坏死因子配体超家族成员(4-1BBL)体外共同转染树突状细胞(DC)后,与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养,观察其体外抑制前列腺癌的生物学效应.方法:将Ad-PSMA、Ad-4-1BBL、Ad-GFP按MOI=200∶1转染DC作为刺激细胞,分为共转染组、PSMA转染组、4-1BBL转染组、阴性对照组(Ad-GFP-DC组)以及未转染DC组,Western blot法检测各组DC细胞中PSMA和4-1BBL蛋白的表达；流式细胞仪分析CD80、CD83、CD86等表型变化；取患者外周静脉血单个核细胞中淋巴细胞用于CIK细胞的诱导培养,按DC∶ CIK=1∶10比例将上述不同转染组DC加入CIK中,共同孵育96h(设普通DC刺激组和单独CIK细胞组为对照),收获的细胞作为效应细胞,流式细胞仪测定不同DC刺激组CIK细胞CD3、CD56表达率,ELISA法检测不同DC-CIK组培养上清IFN-γ、IL-10水平；PE-7AAD凋亡试剂盒检测不同DC-CIK组对人前列腺癌细胞株LNCap、Du145的细胞毒作用.结果:Western blot结果证实PSMA、4-1BBL可在DC上成功表达；各转染组DC表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR共刺激分子表达上调,与未转染组相比较差异显著(P＜0.05).培养14d,不同DC疫苗刺激组CIK以及单独CIK细胞组中CD3+、CD56+、CD3 +/CD56+T细胞比例均高于培养7d的CIK,差异显著(P＜0.05),其中经不同DC疫苗刺激的CIK组上升较单独培养14d-CIK组更明显(P＜0.05).DC-CIK培养上清中PSMA/4-1BBL-DC-CIK组IFN-γ分泌量最高,达1176.10±14.37pg/5×106cells,IL-10分泌量最低,为75.14 ±2.01 pg/5×106cells,与其他各组比较,差异显著(P＜0.05).不同组别DC-CIK作用于LNCap、Du145细胞24h后,荧光显微镜下观察细胞凋亡和坏死明显.同一组别DC疫苗刺激下的CIK细胞对LNCap的杀伤作用强于DU145细胞,差异显著(P＜0.05).而在针对同一种肿瘤细胞时,PSMA/4-1BBL-DC-CIK组的杀伤作用最强,LNCap细胞的凋亡率可达(24.56 ±1.68)％,Du145细胞凋亡率可达(12.67±0.94)％,与PSMA-DC-CIK组、4-1BBL-DC-CIK组相比,差异显著(P＜0.05),而PSMA-DC-CIK和4-1BBL-DC-CIK组的前列腺癌细胞的凋亡率则无显著差异(P＞0.05),但与GFP-DC-CIK、普通DC-CIK、和单独CIK组相比差异显著(P＜0.05).结论:本实验中Ad-PSMA/4-1BBL高效转染的DC具有成熟DC的典型特征,与CIK共培养后提高了CD3 +/CD56+T细胞比例,IFN-γ分泌量显著增高,并增加了对PSMA阳性靶细胞的特异性杀伤,比普通DC-CIK及单独CIK具有更强的杀伤活性.两种肿瘤相关抗原转染DC与CIK共培养后可以更有效地提高CIK细胞的杀伤活性.
目的:本研究通過複製缺陷性腺病毒介導的人前列腺特異性膜抗原基因(PSMA)和腫瘤壞死因子配體超傢族成員(4-1BBL)體外共同轉染樹突狀細胞(DC)後,與細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)共培養,觀察其體外抑製前列腺癌的生物學效應.方法:將Ad-PSMA、Ad-4-1BBL、Ad-GFP按MOI=200∶1轉染DC作為刺激細胞,分為共轉染組、PSMA轉染組、4-1BBL轉染組、陰性對照組(Ad-GFP-DC組)以及未轉染DC組,Western blot法檢測各組DC細胞中PSMA和4-1BBL蛋白的錶達；流式細胞儀分析CD80、CD83、CD86等錶型變化；取患者外週靜脈血單箇覈細胞中淋巴細胞用于CIK細胞的誘導培養,按DC∶ CIK=1∶10比例將上述不同轉染組DC加入CIK中,共同孵育96h(設普通DC刺激組和單獨CIK細胞組為對照),收穫的細胞作為效應細胞,流式細胞儀測定不同DC刺激組CIK細胞CD3、CD56錶達率,ELISA法檢測不同DC-CIK組培養上清IFN-γ、IL-10水平；PE-7AAD凋亡試劑盒檢測不同DC-CIK組對人前列腺癌細胞株LNCap、Du145的細胞毒作用.結果:Western blot結果證實PSMA、4-1BBL可在DC上成功錶達；各轉染組DC錶麵CD80、CD83、CD86、HLA-DR共刺激分子錶達上調,與未轉染組相比較差異顯著(P＜0.05).培養14d,不同DC疫苗刺激組CIK以及單獨CIK細胞組中CD3+、CD56+、CD3 +/CD56+T細胞比例均高于培養7d的CIK,差異顯著(P＜0.05),其中經不同DC疫苗刺激的CIK組上升較單獨培養14d-CIK組更明顯(P＜0.05).DC-CIK培養上清中PSMA/4-1BBL-DC-CIK組IFN-γ分泌量最高,達1176.10±14.37pg/5×106cells,IL-10分泌量最低,為75.14 ±2.01 pg/5×106cells,與其他各組比較,差異顯著(P＜0.05).不同組彆DC-CIK作用于LNCap、Du145細胞24h後,熒光顯微鏡下觀察細胞凋亡和壞死明顯.同一組彆DC疫苗刺激下的CIK細胞對LNCap的殺傷作用彊于DU145細胞,差異顯著(P＜0.05).而在針對同一種腫瘤細胞時,PSMA/4-1BBL-DC-CIK組的殺傷作用最彊,LNCap細胞的凋亡率可達(24.56 ±1.68)％,Du145細胞凋亡率可達(12.67±0.94)％,與PSMA-DC-CIK組、4-1BBL-DC-CIK組相比,差異顯著(P＜0.05),而PSMA-DC-CIK和4-1BBL-DC-CIK組的前列腺癌細胞的凋亡率則無顯著差異(P＞0.05),但與GFP-DC-CIK、普通DC-CIK、和單獨CIK組相比差異顯著(P＜0.05).結論:本實驗中Ad-PSMA/4-1BBL高效轉染的DC具有成熟DC的典型特徵,與CIK共培養後提高瞭CD3 +/CD56+T細胞比例,IFN-γ分泌量顯著增高,併增加瞭對PSMA暘性靶細胞的特異性殺傷,比普通DC-CIK及單獨CIK具有更彊的殺傷活性.兩種腫瘤相關抗原轉染DC與CIK共培養後可以更有效地提高CIK細胞的殺傷活性.
목적:본연구통과복제결함성선병독개도적인전렬선특이성막항원기인(PSMA)화종류배사인자배체초가족성원(4-1BBL)체외공동전염수돌상세포(DC)후,여세포인자유도적살상세포(CIK)공배양,관찰기체외억제전렬선암적생물학효응.방법:장Ad-PSMA、Ad-4-1BBL、Ad-GFP안MOI=200∶1전염DC작위자격세포,분위공전염조、PSMA전염조、4-1BBL전염조、음성대조조(Ad-GFP-DC조)이급미전염DC조,Western blot법검측각조DC세포중PSMA화4-1BBL단백적표체；류식세포의분석CD80、CD83、CD86등표형변화；취환자외주정맥혈단개핵세포중림파세포용우CIK세포적유도배양,안DC∶ CIK=1∶10비례장상술불동전염조DC가입CIK중,공동부육96h(설보통DC자격조화단독CIK세포조위대조),수획적세포작위효응세포,류식세포의측정불동DC자격조CIK세포CD3、CD56표체솔,ELISA법검측불동DC-CIK조배양상청IFN-γ、IL-10수평；PE-7AAD조망시제합검측불동DC-CIK조대인전렬선암세포주LNCap、Du145적세포독작용.결과:Western blot결과증실PSMA、4-1BBL가재DC상성공표체；각전염조DC표면CD80、CD83、CD86、HLA-DR공자격분자표체상조,여미전염조상비교차이현저(P＜0.05).배양14d,불동DC역묘자격조CIK이급단독CIK세포조중CD3+、CD56+、CD3 +/CD56+T세포비례균고우배양7d적CIK,차이현저(P＜0.05),기중경불동DC역묘자격적CIK조상승교단독배양14d-CIK조경명현(P＜0.05).DC-CIK배양상청중PSMA/4-1BBL-DC-CIK조IFN-γ분비량최고,체1176.10±14.37pg/5×106cells,IL-10분비량최저,위75.14 ±2.01 pg/5×106cells,여기타각조비교,차이현저(P＜0.05).불동조별DC-CIK작용우LNCap、Du145세포24h후,형광현미경하관찰세포조망화배사명현.동일조별DC역묘자격하적CIK세포대LNCap적살상작용강우DU145세포,차이현저(P＜0.05).이재침대동일충종류세포시,PSMA/4-1BBL-DC-CIK조적살상작용최강,LNCap세포적조망솔가체(24.56 ±1.68)％,Du145세포조망솔가체(12.67±0.94)％,여PSMA-DC-CIK조、4-1BBL-DC-CIK조상비,차이현저(P＜0.05),이PSMA-DC-CIK화4-1BBL-DC-CIK조적전렬선암세포적조망솔칙무현저차이(P＞0.05),단여GFP-DC-CIK、보통DC-CIK、화단독CIK조상비차이현저(P＜0.05).결론:본실험중Ad-PSMA/4-1BBL고효전염적DC구유성숙DC적전형특정,여CIK공배양후제고료CD3 +/CD56+T세포비례,IFN-γ분비량현저증고,병증가료대PSMA양성파세포적특이성살상,비보통DC-CIK급단독CIK구유경강적살상활성.량충종류상관항원전염DC여CIK공배양후가이경유효지제고CIK세포적살상활성.
