CAJ | 학술논문

目的探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在体外增殖过程中即刻早期(immediately early,IE)基因的作用.方法设计并化学合成3条靶向IE基因外显子序列的siRNA,应用阳离子脂质体法将干扰序列转染入人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblast,HELF)细胞,用HCMV感染已转染入siRNA的细胞,同时设置正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和转染试剂对照组.采用流式细胞术检测转染效果,荧光定量PCR和琼脂糖凝胶电泳方法检测分析导入的siRNA对IE基因和GAPDH阳性对照基因的抑制效果以及早期(E)基因和晚期(L)基因的表达情况.结果 siRNA成功导入HELF细胞内,6孔板内5μl脂质体可导入的最佳siRNA量约为100pmol,阳性对照组GAPDH表达量较其他对照组有明显的下降(P＜0.05),抑制率为70.8％;干扰组中3条siRNA对IE基因的表达均有抑制作用.IE基因表达下调后,E基因和L基因的表达较对照组也有明显下降(P＜0.05).结论在体外,靶向IE基因的siRNA能有效抑制IE基因的表达从而影响E基因和L基因的表达,表明IE基因的有效表达是E基因和L基因表达的基础.
목적 탐토인거세포병독(human cytomegalovirus,HCMV)재체외증식과정중즉각조기(immediately early,IE)기인적작용.방법 설계병화학합성3조파향IE기인외현자서렬적siRNA,응용양리자지질체법장간우서렬전염입인배폐성섬유(human embryonic lung fibroblast,HELF)세포,용HCMV감염이전염입siRNA적세포,동시설치정상대조조、음성대조조、양성대조조화전염시제대조조.채용류식세포술검측전염효과,형광정량PCR화경지당응효전영방법검측분석도입적siRNA대IE기인화GAPDH양성대조기인적억제효과이급조기(E)기인화만기(L)기인적표체정황.결과 siRNA성공도입HELF세포내,6공판내5μl지질체가도입적최가siRNA량약위100pmol,양성대조조GAPDH표체량교기타대조조유명현적하강(P＜0.05),억제솔위70.8％;간우조중3조siRNA대IE기인적표체균유억제작용.IE기인표체하조후,E기인화L기인적표체교대조조야유명현하강(P＜0.05).결론 재체외,파향IE기인적siRNA능유효억제IE기인적표체종이영향E기인화L기인적표체,표명IE기인적유효표체시E기인화L기인표체적기출.