上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2014年
4期
14-18
,共5页
杨敏敏%陆海波%韩伟%郜尽
楊敏敏%陸海波%韓偉%郜儘
양민민%륙해파%한위%고진
重组人白介素1受体拮抗剂%结合抗体%酶联免疫吸附测定法
重組人白介素1受體拮抗劑%結閤抗體%酶聯免疫吸附測定法
중조인백개소1수체길항제%결합항체%매련면역흡부측정법
rhIL-1Ra%binding antibody%ELISA
限制大分子药物使用的关键因素之一为诱导抗体产生.新药安全性评价时往往不得不采用多种动物评价人源蛋白的安全性,因此,测定动物产生抗体水平是正确评价大分子药物的前提.为了检验重组人白介素1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)在动物体内的安全性,采用间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定rhIL-1Ra结合抗体,以纯化抗原作为包被载体,加入供试品后再加酶标抗体,用底物显色并在酶标仪上读取结果.结果显示,抗原包被浓度为10μg/mL、酶标二抗工作浓度为1∶5 000、阳性对照工作浓度为1∶10 000、待检血清样品稀释度从1∶100开始较为合适.SD大鼠肌肉注射给予rhIL-1Ra 4周试验中,剂量分别为0、5、15和30mg/kg.结果表明,剂量≥5 mg/kg时给药2周后可诱导产生结合抗体.食蟹猴每天1次连续给药4周,剂量分别采用0、2.5、7.5和15.0mg/kg,当剂量≥2.5 mg/kg时可诱导产生结合抗体.
限製大分子藥物使用的關鍵因素之一為誘導抗體產生.新藥安全性評價時往往不得不採用多種動物評價人源蛋白的安全性,因此,測定動物產生抗體水平是正確評價大分子藥物的前提.為瞭檢驗重組人白介素1受體拮抗劑(rhIL-1Ra)在動物體內的安全性,採用間接酶聯免疫吸附測定法(ELISA)測定rhIL-1Ra結閤抗體,以純化抗原作為包被載體,加入供試品後再加酶標抗體,用底物顯色併在酶標儀上讀取結果.結果顯示,抗原包被濃度為10μg/mL、酶標二抗工作濃度為1∶5 000、暘性對照工作濃度為1∶10 000、待檢血清樣品稀釋度從1∶100開始較為閤適.SD大鼠肌肉註射給予rhIL-1Ra 4週試驗中,劑量分彆為0、5、15和30mg/kg.結果錶明,劑量≥5 mg/kg時給藥2週後可誘導產生結閤抗體.食蟹猴每天1次連續給藥4週,劑量分彆採用0、2.5、7.5和15.0mg/kg,噹劑量≥2.5 mg/kg時可誘導產生結閤抗體.
한제대분자약물사용적관건인소지일위유도항체산생.신약안전성평개시왕왕불득불채용다충동물평개인원단백적안전성,인차,측정동물산생항체수평시정학평개대분자약물적전제.위료검험중조인백개소1수체길항제(rhIL-1Ra)재동물체내적안전성,채용간접매련면역흡부측정법(ELISA)측정rhIL-1Ra결합항체,이순화항원작위포피재체,가입공시품후재가매표항체,용저물현색병재매표의상독취결과.결과현시,항원포피농도위10μg/mL、매표이항공작농도위1∶5 000、양성대조공작농도위1∶10 000、대검혈청양품희석도종1∶100개시교위합괄.SD대서기육주사급여rhIL-1Ra 4주시험중,제량분별위0、5、15화30mg/kg.결과표명,제량≥5 mg/kg시급약2주후가유도산생결합항체.식해후매천1차련속급약4주,제량분별채용0、2.5、7.5화15.0mg/kg,당제량≥2.5 mg/kg시가유도산생결합항체.
