中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
8期
1422-1427
,共6页
汤绍辉%吴胜兰%王旷靖%张良鹏%罗羽宏%曹明溶%周鸿科
湯紹輝%吳勝蘭%王曠靖%張良鵬%囉羽宏%曹明溶%週鴻科
탕소휘%오성란%왕광정%장량붕%라우굉%조명용%주홍과
hAFP/h TERT双启动子%RNA干扰%人胰岛素样生长因子Ⅱ%癌,肝细胞
hAFP/h TERT雙啟動子%RNA榦擾%人胰島素樣生長因子Ⅱ%癌,肝細胞
hAFP/h TERT쌍계동자%RNA간우%인이도소양생장인자Ⅱ%암,간세포
hTERT/hAFP dual promoters%RNA interference%Insulin-like growth factor Ⅱ%Carcinoma,hepatocellular
目的:设计并筛选高效沉默胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因的小干扰RNA (siRNA)序列,构建由重组人甲胎蛋白(hAFP)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)双启动子调控的该siRNA表达载体,观察其对肝癌细胞生长的影响.方法:根据siRNA设计原则,参照IGF-Ⅱ mRNA序列设计3对siRNA序列及1对阴性对照序列,转染人肝癌Huh7细胞,转染24h后采用实时荧光定量PCR检测IGF-Ⅱ mRNA表达量变化,筛选干扰效率最高的siRNA序列.采用PCR扩增出hAFP及hTERT启动子的核心序列,应用基因重组技术构建重组hAF和hTERT双启动子调控的该siRNA表达载体.将上述siRNA表达载体转染Huh7细胞及L-02人正常肝细胞,观察IGF-Ⅱ mRNA表达及细胞生长情况变化.结果:实时荧光定量PCR显示,siRNA3在25 nmol/L浓度时抑制效率最高,约90％.成功扩增hAFP及hTERT启动子核心序列,将其分别克隆人pGL3-Basic载体,构建成重组pGL3-hAFP-hTERT载体;将siRNA3克隆至pGL3-hAFP-hTERT载体,构建成重组pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3表达载体.Huh7细胞IGF-Ⅱ mRNA表达量显著降低,抑制效率达86％,细胞增殖受到明显抑制,G1期细胞比例显著增加;L-02细胞上述指标无明显改变.结论:成功构建双重RNA聚合酶Ⅱ启动子(hAFP及hTERT双启动子)调控的针对IGF-H基因的siRNA表达载体,即pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3;该siRNA表达载体可特异性抑制IGF-Ⅱ mRNA表达及肝癌细胞生长.
目的:設計併篩選高效沉默胰島素樣生長因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因的小榦擾RNA (siRNA)序列,構建由重組人甲胎蛋白(hAFP)和人耑粒酶逆轉錄酶(hTERT)雙啟動子調控的該siRNA錶達載體,觀察其對肝癌細胞生長的影響.方法:根據siRNA設計原則,參照IGF-Ⅱ mRNA序列設計3對siRNA序列及1對陰性對照序列,轉染人肝癌Huh7細胞,轉染24h後採用實時熒光定量PCR檢測IGF-Ⅱ mRNA錶達量變化,篩選榦擾效率最高的siRNA序列.採用PCR擴增齣hAFP及hTERT啟動子的覈心序列,應用基因重組技術構建重組hAF和hTERT雙啟動子調控的該siRNA錶達載體.將上述siRNA錶達載體轉染Huh7細胞及L-02人正常肝細胞,觀察IGF-Ⅱ mRNA錶達及細胞生長情況變化.結果:實時熒光定量PCR顯示,siRNA3在25 nmol/L濃度時抑製效率最高,約90％.成功擴增hAFP及hTERT啟動子覈心序列,將其分彆剋隆人pGL3-Basic載體,構建成重組pGL3-hAFP-hTERT載體;將siRNA3剋隆至pGL3-hAFP-hTERT載體,構建成重組pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3錶達載體.Huh7細胞IGF-Ⅱ mRNA錶達量顯著降低,抑製效率達86％,細胞增殖受到明顯抑製,G1期細胞比例顯著增加;L-02細胞上述指標無明顯改變.結論:成功構建雙重RNA聚閤酶Ⅱ啟動子(hAFP及hTERT雙啟動子)調控的針對IGF-H基因的siRNA錶達載體,即pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3;該siRNA錶達載體可特異性抑製IGF-Ⅱ mRNA錶達及肝癌細胞生長.
목적:설계병사선고효침묵이도소양생장인자Ⅱ(IGF-Ⅱ)기인적소간우RNA (siRNA)서렬,구건유중조인갑태단백(hAFP)화인단립매역전록매(hTERT)쌍계동자조공적해siRNA표체재체,관찰기대간암세포생장적영향.방법:근거siRNA설계원칙,삼조IGF-Ⅱ mRNA서렬설계3대siRNA서렬급1대음성대조서렬,전염인간암Huh7세포,전염24h후채용실시형광정량PCR검측IGF-Ⅱ mRNA표체량변화,사선간우효솔최고적siRNA서렬.채용PCR확증출hAFP급hTERT계동자적핵심서렬,응용기인중조기술구건중조hAF화hTERT쌍계동자조공적해siRNA표체재체.장상술siRNA표체재체전염Huh7세포급L-02인정상간세포,관찰IGF-Ⅱ mRNA표체급세포생장정황변화.결과:실시형광정량PCR현시,siRNA3재25 nmol/L농도시억제효솔최고,약90％.성공확증hAFP급hTERT계동자핵심서렬,장기분별극륭인pGL3-Basic재체,구건성중조pGL3-hAFP-hTERT재체;장siRNA3극륭지pGL3-hAFP-hTERT재체,구건성중조pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3표체재체.Huh7세포IGF-Ⅱ mRNA표체량현저강저,억제효솔체86％,세포증식수도명현억제,G1기세포비례현저증가;L-02세포상술지표무명현개변.결론:성공구건쌍중RNA취합매Ⅱ계동자(hAFP급hTERT쌍계동자)조공적침대IGF-H기인적siRNA표체재체,즉pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3;해siRNA표체재체가특이성억제IGF-Ⅱ mRNA표체급간암세포생장.
