中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
8期
1358-1364
,共7页
多柔比星%硫氧还蛋白%硝基化%心肌细胞%细胞凋亡
多柔比星%硫氧還蛋白%硝基化%心肌細胞%細胞凋亡
다유비성%류양환단백%초기화%심기세포%세포조망
Doxorubicin%Thioredoxin%Nitration%Cardiomyocytes%Apoptosis
目的:探讨硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)硝基化在多柔比星诱导的乳鼠心肌细胞凋亡过程中的作用.方法:体外分离培养新生SD大鼠心肌细胞,直接给予多柔比星刺激和预孵育过氧亚硝基阴离子(ONOO-)清除剂锰(Ⅲ)四(1-甲基-4-吡啶基)卟啉(MnTMPyP)后再给予多柔比星刺激.MTT检测细胞存活率,细胞凋亡荧光Hoechst 33258试剂盒检测细胞凋亡情况,分光光度法检测caspase-3的活性,Western blotting法检测聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶l剪切片段[cleaved poly(ADP-ribose) polymerase-1,cleaved PARP-1]、凋亡信号调节激酶l(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)、磷酸化ASK1(p-ASKl)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)和磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达,免疫沉淀法检测Trx-NT和Trx-硝基酪氨酸的形成.结果:给予多柔比星后,心肌细胞Hoechst荧光染色观察到明显凋亡,MnTMPyP预保护后,凋亡情况减轻.多柔比星组与正常组相比,Trx硝基化水平升高,caspase-3活性、cleaved PARP-1和p-p38 MAPK表达增加(P＜0.05),TrxASK1和p-ASK1表达减少(P＜0.05).MnTMPyP预保护组与多柔比星组相比,Trx硝基化水平降低(P＜0.05),caspase-3活性、cleaved PARP-1和p-p38 MAPK表达降低(P＜0.05),Tx-ASK1和p-ASK1表达增加(P＜0.05).结论:多柔比星刺激心肌细胞后,Trx硝基化水平和细胞凋亡明显增加;给予ONOO-清除剂MnTMPyP后,Trx硝基化程度和凋亡情况得到明显改善.Trx硝基化可能是多柔比星诱导心肌细胞凋亡的机制之一.
目的:探討硫氧還蛋白(thioredoxin,Trx)硝基化在多柔比星誘導的乳鼠心肌細胞凋亡過程中的作用.方法:體外分離培養新生SD大鼠心肌細胞,直接給予多柔比星刺激和預孵育過氧亞硝基陰離子(ONOO-)清除劑錳(Ⅲ)四(1-甲基-4-吡啶基)卟啉(MnTMPyP)後再給予多柔比星刺激.MTT檢測細胞存活率,細胞凋亡熒光Hoechst 33258試劑盒檢測細胞凋亡情況,分光光度法檢測caspase-3的活性,Western blotting法檢測聚腺苷痠二燐痠覈糖聚閤酶l剪切片段[cleaved poly(ADP-ribose) polymerase-1,cleaved PARP-1]、凋亡信號調節激酶l(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)、燐痠化ASK1(p-ASKl)、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)和燐痠化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的錶達,免疫沉澱法檢測Trx-NT和Trx-硝基酪氨痠的形成.結果:給予多柔比星後,心肌細胞Hoechst熒光染色觀察到明顯凋亡,MnTMPyP預保護後,凋亡情況減輕.多柔比星組與正常組相比,Trx硝基化水平升高,caspase-3活性、cleaved PARP-1和p-p38 MAPK錶達增加(P＜0.05),TrxASK1和p-ASK1錶達減少(P＜0.05).MnTMPyP預保護組與多柔比星組相比,Trx硝基化水平降低(P＜0.05),caspase-3活性、cleaved PARP-1和p-p38 MAPK錶達降低(P＜0.05),Tx-ASK1和p-ASK1錶達增加(P＜0.05).結論:多柔比星刺激心肌細胞後,Trx硝基化水平和細胞凋亡明顯增加;給予ONOO-清除劑MnTMPyP後,Trx硝基化程度和凋亡情況得到明顯改善.Trx硝基化可能是多柔比星誘導心肌細胞凋亡的機製之一.
목적:탐토류양환단백(thioredoxin,Trx)초기화재다유비성유도적유서심기세포조망과정중적작용.방법:체외분리배양신생SD대서심기세포,직접급여다유비성자격화예부육과양아초기음리자(ONOO-)청제제맹(Ⅲ)사(1-갑기-4-필정기)계람(MnTMPyP)후재급여다유비성자격.MTT검측세포존활솔,세포조망형광Hoechst 33258시제합검측세포조망정황,분광광도법검측caspase-3적활성,Western blotting법검측취선감산이린산핵당취합매l전절편단[cleaved poly(ADP-ribose) polymerase-1,cleaved PARP-1]、조망신호조절격매l(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)、린산화ASK1(p-ASKl)、p38사렬원활화단백격매(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)화린산화p38 MAPK(p-p38 MAPK)적표체,면역침정법검측Trx-NT화Trx-초기락안산적형성.결과:급여다유비성후,심기세포Hoechst형광염색관찰도명현조망,MnTMPyP예보호후,조망정황감경.다유비성조여정상조상비,Trx초기화수평승고,caspase-3활성、cleaved PARP-1화p-p38 MAPK표체증가(P＜0.05),TrxASK1화p-ASK1표체감소(P＜0.05).MnTMPyP예보호조여다유비성조상비,Trx초기화수평강저(P＜0.05),caspase-3활성、cleaved PARP-1화p-p38 MAPK표체강저(P＜0.05),Tx-ASK1화p-ASK1표체증가(P＜0.05).결론:다유비성자격심기세포후,Trx초기화수평화세포조망명현증가;급여ONOO-청제제MnTMPyP후,Trx초기화정도화조망정황득도명현개선.Trx초기화가능시다유비성유도심기세포조망적궤제지일.
