中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
7期
559-562
,共4页
杨玉菊%姜福成%柴政%符芳%郑楠%王香玲%郭殿磊%李曦
楊玉菊%薑福成%柴政%符芳%鄭楠%王香玲%郭殿磊%李晞
양옥국%강복성%시정%부방%정남%왕향령%곽전뢰%리희
副猪嗜血杆菌%猪源化嵌合抗体%杆状病毒表达
副豬嗜血桿菌%豬源化嵌閤抗體%桿狀病毒錶達
부저기혈간균%저원화감합항체%간상병독표체
Haemophilus parasuis%mouse-pig chimeric antibody%baculovirus expression
为构建具有活性的抗副猪嗜血杆菌(H.parasuis)鼠-猪嵌合单链抗体(scFv),本研究以H.parasuis单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞1D8株的总RNA制备的cDNA为模板,通过RT-PCR分别扩增抗MAb轻链、重链可变区序列及猪抗体轻链和重链恒定区序列,并将这些片段经重叠延伸PCR分别扩增可变区与恒定区的轻链与重链的序列.将扩增的两个目的基因克隆于双向表达载体pFast-Bac-Dual中,并进一步以其构建的重组杆粒,转染Sf9昆虫细胞筛选制备稳定表达的抗H.parasuis猪源化嵌合的scFv重组杆状病毒.Western blot、ELISA、体外和体内的抑菌试验表明,抗H.parasuis猪源化嵌合scFv具有中和活性和抑制细菌增殖的能力,可以为进一步的H.parasuis的抗体治疗奠定基础.
為構建具有活性的抗副豬嗜血桿菌(H.parasuis)鼠-豬嵌閤單鏈抗體(scFv),本研究以H.parasuis單剋隆抗體(MAb)雜交瘤細胞1D8株的總RNA製備的cDNA為模闆,通過RT-PCR分彆擴增抗MAb輕鏈、重鏈可變區序列及豬抗體輕鏈和重鏈恆定區序列,併將這些片段經重疊延伸PCR分彆擴增可變區與恆定區的輕鏈與重鏈的序列.將擴增的兩箇目的基因剋隆于雙嚮錶達載體pFast-Bac-Dual中,併進一步以其構建的重組桿粒,轉染Sf9昆蟲細胞篩選製備穩定錶達的抗H.parasuis豬源化嵌閤的scFv重組桿狀病毒.Western blot、ELISA、體外和體內的抑菌試驗錶明,抗H.parasuis豬源化嵌閤scFv具有中和活性和抑製細菌增殖的能力,可以為進一步的H.parasuis的抗體治療奠定基礎.
위구건구유활성적항부저기혈간균(H.parasuis)서-저감합단련항체(scFv),본연구이H.parasuis단극륭항체(MAb)잡교류세포1D8주적총RNA제비적cDNA위모판,통과RT-PCR분별확증항MAb경련、중련가변구서렬급저항체경련화중련항정구서렬,병장저사편단경중첩연신PCR분별확증가변구여항정구적경련여중련적서렬.장확증적량개목적기인극륭우쌍향표체재체pFast-Bac-Dual중,병진일보이기구건적중조간립,전염Sf9곤충세포사선제비은정표체적항H.parasuis저원화감합적scFv중조간상병독.Western blot、ELISA、체외화체내적억균시험표명,항H.parasuis저원화감합scFv구유중화활성화억제세균증식적능력,가이위진일보적H.parasuis적항체치료전정기출.
