中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
7期
542-546
,共5页
董井泉%张蕾%马波%师东方%王君伟
董井泉%張蕾%馬波%師東方%王君偉
동정천%장뢰%마파%사동방%왕군위
鸭肝炎病毒%VP1蛋白%抗原优势区%间接ELISA
鴨肝炎病毒%VP1蛋白%抗原優勢區%間接ELISA
압간염병독%VP1단백%항원우세구%간접ELISA
duck hepatitis virus type Ⅰ%VP1 protein%antigenic dominant region%indirect ELISA
为鉴定Ⅰ型鸭肝炎病-毒(DHV-Ⅰ)VP1蛋白优势抗原区及建立DHV-Ⅰ抗体检测ELISA方法,本研究以重组质粒pEasy-VP1为模板,将其分为5段(VP1-a～e)及全长VP1经PCR扩增,并分别克隆于pET-32a(+)进行原核表达.经western blot分析表明,截短表达的蛋白VP1-c (80 aa～150 aa)抗原性良好.将其纯化作为包被抗原建立了DHV-Ⅰ抗体的间接ELISA检测方法.经反应条件优化确定:VP1-c包被浓度为2μg/mL,DHV-Ⅰ抗血清稀释度为1∶20,其临界值为0.208.该方法能够特异性检测DHV抗体,与其他常见的几种鸭病阳性血清无交叉反应;其批内和批间重复性试验变异系数均小于9％.应用建立的ELISA方法对48份鸭血清进行了检测,与中和试验相比较,符合率为86.9％.表明该方法可以初步应用于DHV抗体的检测和血清流行病学调查.
為鑒定Ⅰ型鴨肝炎病-毒(DHV-Ⅰ)VP1蛋白優勢抗原區及建立DHV-Ⅰ抗體檢測ELISA方法,本研究以重組質粒pEasy-VP1為模闆,將其分為5段(VP1-a～e)及全長VP1經PCR擴增,併分彆剋隆于pET-32a(+)進行原覈錶達.經western blot分析錶明,截短錶達的蛋白VP1-c (80 aa～150 aa)抗原性良好.將其純化作為包被抗原建立瞭DHV-Ⅰ抗體的間接ELISA檢測方法.經反應條件優化確定:VP1-c包被濃度為2μg/mL,DHV-Ⅰ抗血清稀釋度為1∶20,其臨界值為0.208.該方法能夠特異性檢測DHV抗體,與其他常見的幾種鴨病暘性血清無交扠反應;其批內和批間重複性試驗變異繫數均小于9％.應用建立的ELISA方法對48份鴨血清進行瞭檢測,與中和試驗相比較,符閤率為86.9％.錶明該方法可以初步應用于DHV抗體的檢測和血清流行病學調查.
위감정Ⅰ형압간염병-독(DHV-Ⅰ)VP1단백우세항원구급건립DHV-Ⅰ항체검측ELISA방법,본연구이중조질립pEasy-VP1위모판,장기분위5단(VP1-a～e)급전장VP1경PCR확증,병분별극륭우pET-32a(+)진행원핵표체.경western blot분석표명,절단표체적단백VP1-c (80 aa～150 aa)항원성량호.장기순화작위포피항원건립료DHV-Ⅰ항체적간접ELISA검측방법.경반응조건우화학정:VP1-c포피농도위2μg/mL,DHV-Ⅰ항혈청희석도위1∶20,기림계치위0.208.해방법능구특이성검측DHV항체,여기타상견적궤충압병양성혈청무교차반응;기비내화비간중복성시험변이계수균소우9％.응용건립적ELISA방법대48빈압혈청진행료검측,여중화시험상비교,부합솔위86.9％.표명해방법가이초보응용우DHV항체적검측화혈청류행병학조사.
