中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
7期
530-533
,共4页
王淑亚%郭东春%李影%王雅静%刘家森%姜骞%曲连东
王淑亞%郭東春%李影%王雅靜%劉傢森%薑鶱%麯連東
왕숙아%곽동춘%리영%왕아정%류가삼%강건%곡련동
多杀性巴氏杆菌%Lon蛋白酶%原核表达%ATPase活性
多殺性巴氏桿菌%Lon蛋白酶%原覈錶達%ATPase活性
다살성파씨간균%Lon단백매%원핵표체%ATPase활성
Pasteurella multocida%Lon protease%prokaryotic expression%ATPase activity
为表达多杀性巴氏杆菌(P.multocida) Lon蛋白及检测其生物活性,本研究通过PCR扩增P.multocida C51-17株Lon基因,将其克隆到质粒pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET30a-Lon,并将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达重组蛋白Lon,采用Ni-NTA His-Bind Resin纯化目的蛋白.SDS-PAGE结果表明,重组蛋白Lon分子量大小约为97 ku,主要以可溶性蛋白形式表达;western blot检测结果表明,重组表达蛋白能够被P.multocida阳性血清识别;ATPase活性检测试验表明,纯化的重组蛋白Lon具有ATPase活性,其将ATP降解为ADP的酶活性可以达到27 708.47 μmol/(mg· min).本研究表达了P.multocida Lon重组蛋白,并且测定其ATPase活性,为进一步研究Lon蛋白在P.multocida致病中的作用奠定了基础.
為錶達多殺性巴氏桿菌(P.multocida) Lon蛋白及檢測其生物活性,本研究通過PCR擴增P.multocida C51-17株Lon基因,將其剋隆到質粒pET-30a(+)中,構建重組錶達質粒pET30a-Lon,併將其轉化至大腸桿菌BL21 (DE3)感受態細胞中,經IPTG誘導錶達重組蛋白Lon,採用Ni-NTA His-Bind Resin純化目的蛋白.SDS-PAGE結果錶明,重組蛋白Lon分子量大小約為97 ku,主要以可溶性蛋白形式錶達;western blot檢測結果錶明,重組錶達蛋白能夠被P.multocida暘性血清識彆;ATPase活性檢測試驗錶明,純化的重組蛋白Lon具有ATPase活性,其將ATP降解為ADP的酶活性可以達到27 708.47 μmol/(mg· min).本研究錶達瞭P.multocida Lon重組蛋白,併且測定其ATPase活性,為進一步研究Lon蛋白在P.multocida緻病中的作用奠定瞭基礎.
위표체다살성파씨간균(P.multocida) Lon단백급검측기생물활성,본연구통과PCR확증P.multocida C51-17주Lon기인,장기극륭도질립pET-30a(+)중,구건중조표체질립pET30a-Lon,병장기전화지대장간균BL21 (DE3)감수태세포중,경IPTG유도표체중조단백Lon,채용Ni-NTA His-Bind Resin순화목적단백.SDS-PAGE결과표명,중조단백Lon분자량대소약위97 ku,주요이가용성단백형식표체;western blot검측결과표명,중조표체단백능구피P.multocida양성혈청식별;ATPase활성검측시험표명,순화적중조단백Lon구유ATPase활성,기장ATP강해위ADP적매활성가이체도27 708.47 μmol/(mg· min).본연구표체료P.multocida Lon중조단백,병차측정기ATPase활성,위진일보연구Lon단백재P.multocida치병중적작용전정료기출.
