CAJ | 학술논문

[目的]建立稳定快速的慢病毒转基因羊DNA水平检测方法.[方法]采集初生转基因羔羊的子叶、脐带、尾组织以及死亡羔羊的全身各组织,提取基因组DNA作为模板进行PCR检测,以Follistatin基因N+D1片段特异性引物进行PCR检测;同时,对慢病毒载体的CMV启动子、5’-LTR等结构元件进行PCR检测;提取死亡羔羊的全身组织以及转基因羔羊的活体肌肉组织总RNA,进行RT-PCR检测.[结果]采用试剂盒提取的基因组DNA比常规方法提取的DNA快速、高效,且更易被检测,扩增时的引物采用载体上游与目标基因下游的组合大大增加了检测的特异性,避免了内源性目标基因的干扰而造成假阳性;初生转基因羔羊的尾组织可作为PCR检测的组织样品,其结果可靠、准确;对CMV启动子及5’-LTR等结构元件作PCR检测为转基因动物的安全性考察提供了数据,同时验证了转基因羔羊目的基因的检测结果;对转基因羔羊肌肉组织提取总RNA后进行RT-PCR检测,其中有3只羔羊没有检测到转录产物,其他均有转录.[结论]该研究建立的转基因绵羊PCR检测方法高效、快速且准确,为进一步蛋白水平检测提供试验依据,也为建立转基因绵羊系统性多层次的检测方法奠定基础,还为转基因绵羊的安全监测提供了稳定的技术平台.
[목적]건립은정쾌속적만병독전기인양DNA수평검측방법.[방법]채집초생전기인고양적자협、제대、미조직이급사망고양적전신각조직,제취기인조DNA작위모판진행PCR검측,이Follistatin기인N+D1편단특이성인물진행PCR검측;동시,대만병독재체적CMV계동자、5’-LTR등결구원건진행PCR검측;제취사망고양적전신조직이급전기인고양적활체기육조직총RNA,진행RT-PCR검측.[결과]채용시제합제취적기인조DNA비상규방법제취적DNA쾌속、고효,차경역피검측,확증시적인물채용재체상유여목표기인하유적조합대대증가료검측적특이성,피면료내원성목표기인적간우이조성가양성;초생전기인고양적미조직가작위PCR검측적조직양품,기결과가고、준학;대CMV계동자급5’-LTR등결구원건작PCR검측위전기인동물적안전성고찰제공료수거,동시험증료전기인고양목적기인적검측결과;대전기인고양기육조직제취총RNA후진행RT-PCR검측,기중유3지고양몰유검측도전록산물,기타균유전록.[결론]해연구건립적전기인면양PCR검측방법고효、쾌속차준학,위진일보단백수평검측제공시험의거,야위건립전기인면양계통성다층차적검측방법전정기출,환위전기인면양적안전감측제공료은정적기술평태.