CAJ | 학술논문

W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.为建立W-4的转基因事件特异性PCR检测技术,应用温度不对称PCR(TAIL-PCR)扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列.其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G+C含量为31.27％、A+T含量为68.73％;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G+C含量为32.6％、A+T含量为67.4％,表明该T-DNA整合在富含AT区.序列比对结果发现,该转基因事件中,T-DNA左边界序列完全整合到油菜基因组中,仅有1个碱基由G转换成了A.而右边界则缺失了包括RBborder在内的62个碱基.结果表明:转基因高油酸油菜T-DNA的整合是一次无载体序列的整合.依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计了2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485和405 bp的预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术.应用该检测技术可以从含有0.1％ W-4基因组DNA的混合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达0.1％.可对W-4的转基因事件进行特异性检测.
W-4시통과농간균개도법장fad2기인적반향중복서렬표체광전입감람형유채Westar후획득적전기인고유산유채품계.위건립W-4적전기인사건특이성PCR검측기술,응용온도불대칭PCR(TAIL-PCR)확증획득전기인유채W-4적T-DNA삽입위점적좌、우방측서렬.기중우변계방측서렬장도위290 bp,기감기조성G+C함량위31.27％、A+T함량위68.73％;좌변계방측서렬장도위365 bp,기감기조성G+C함량위32.6％、A+T함량위67.4％,표명해T-DNA정합재부함AT구.서렬비대결과발현,해전기인사건중,T-DNA좌변계서렬완전정합도유채기인조중,부유1개감기유G전환성료A.이우변계칙결실료포괄RBborder재내적62개감기.결과표명:전기인고유산유채T-DNA적정합시일차무재체서렬적정합.의거좌、우변계방측서렬화전기인재체적T-DNA좌우변계서렬설계료2대특이성인물TLF/TLR화TRF/TRR,능종W-4기인조DNA중확증출대소분별위485화405 bp적예기산물,이재기타전기인유채、비전기인유채적기인조DNA화공백대조중균무특이성확증산물,거차건립료W-4적전기인사건특이성PCR검측기술.응용해검측기술가이종함유0.1％ W-4기인조DNA적혼합양품중확증출특이산물,검측령민도체0.1％.가대W-4적전기인사건진행특이성검측.