CAJ | 학술논문

本研究利用精原干细胞介导法体内转染重组载体pVITRO2-Mx-NA以生产抗病转基因鸡.采用睾丸注射法将脂质体包裹的线性化质粒通过随机打点注射入公鸡睾丸,采集25、50、60、70d后试验公鸡的精液,提取基因组DNA,采用常规PCR检测外源Mx-NA联合基因的整合;转染后60d采集阳性公鸡精液人工授精母鸡,采用PCR和Western blot方法检测后代血液中外源NA-Mx联合基因的表达情况.结果表明:PCR检测证实外源Mx-NA联合基因已在精子基因组中表达,精液PCR阳性率为33.33％(2/6),且能通过体外受精在后代中检测到,后代PCR检测的阳性率为31.43％(11/35),Western blot检测F1代阳性率为28.6％(10/35).以上结果证明外源Mx-NA基因能稳定整合到鸡的基因组中,表明睾丸注射法是一种操作简单、有效的制备抗病转基因鸡的方法.
본연구이용정원간세포개도법체내전염중조재체pVITRO2-Mx-NA이생산항병전기인계.채용고환주사법장지질체포과적선성화질립통과수궤타점주사입공계고환,채집25、50、60、70d후시험공계적정액,제취기인조DNA,채용상규PCR검측외원Mx-NA연합기인적정합;전염후60d채집양성공계정액인공수정모계,채용PCR화Western blot방법검측후대혈액중외원NA-Mx연합기인적표체정황.결과표명:PCR검측증실외원Mx-NA연합기인이재정자기인조중표체,정액PCR양성솔위33.33％(2/6),차능통과체외수정재후대중검측도,후대PCR검측적양성솔위31.43％(11/35),Western blot검측F1대양성솔위28.6％(10/35).이상결과증명외원Mx-NA기인능은정정합도계적기인조중,표명고환주사법시일충조작간단、유효적제비항병전기인계적방법.