中华糖尿病杂志
中華糖尿病雜誌
중화당뇨병잡지
CHINES JOURNAL OF DLABETES MELLITUS
2014年
7期
534-537
,共4页
秦洁%马春明%张姬欣%聂琳%张红霞%马禅娟%柳洁
秦潔%馬春明%張姬訢%聶琳%張紅霞%馬禪娟%柳潔
진길%마춘명%장희흔%섭림%장홍하%마선연%류길
硫辛酸%高糖%足细胞%内质网应激反应
硫辛痠%高糖%足細胞%內質網應激反應
류신산%고당%족세포%내질망응격반응
Lipoic acid%High glucose%Kidney podocytes%Endoplasmic reticulum stress thioctic acid
目的：观察条件永生化的小鼠足细胞在高糖及硫辛酸干预环境下，足细胞凋亡率及内质网应激反应（ ERS ）标志分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（ Caspase-12）和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达量，探究足细胞凋亡的发生与内质网应激反应的关系。方法将分化良好的足细胞随机分为：正常葡萄糖浓度对照组（5.6 mmol/L）、甘露醇高渗对照组（25 mmol/L）、高糖组（25 mmol/L）、高糖＋硫辛酸组（25 mmol/L高糖＋500μmol/L硫辛酸）。作用48 h后，流式细胞仪测定各组足细胞凋亡率；实时定量聚合酶链反应（ RT-PCR）技术检测GRP78及Caspase-12 mRNA的表达水平，Western blotting技术检测GRP78及Caspase-12蛋白质表达水平，各组之间凋亡率及GRP78与Caspase-12的mRNA与蛋白的表达量比较采用LSD-t检验。结果（1）流式细胞仪检测各组足细胞凋亡率发现：正常葡萄糖浓度对照组足细胞凋亡率与高渗对照组足细胞凋亡率相似（ P＞0.05）；高糖组足细胞凋亡率较正常葡萄糖浓度对照组明显升高[（14.0±1.1）％比（3.4±0.6）％，t＝9.12，P＜0.05]；高糖＋硫辛酸组足细胞的凋亡率与高糖组相比明显降低[（14.0±1.1）％比（7.8±0.6）％，t＝7.73，P＜0.05]。（2）高糖组GRP78与Caspase-12 mRNA的表达量与正常葡萄糖浓度对照组相比，表达量均明显增加（分别为2.62±0.57比0.85±0.24，10.04±2.28比1.28±0.97， t ＝6.75、25.84，均 P ＜0.05），高糖＋硫辛酸组GRP78与Caspase-12 mRNA的表达量与高糖组相比表达量均明显下降（分别为0.82±0.22比2.62±0.57，4.98±0.55比10.04±2.28，t＝3.83、11.83，均P＜0.05）。（3）高糖组GRP78与Caspase-12蛋白表达量与正常葡萄糖浓度对照组相比明显增加（分别为：2.48±0.19比0.37±0.04，2.07±0.18比0.47±0.08，t＝17.55、12.34，均P＜0.05），高糖＋硫辛酸组GRP78与Caspase-12蛋白质表达量与高糖组相比表达量均明显下降（分别为0.61±0.15比2.48±0.19，0.89±0.18比2.07±0.18，t＝4.42、3.25，均P＜0.05）。结论高糖可以通过引起内质网应激反应诱导足细胞发生凋亡，硫辛酸可以通过减弱内质网应激反应，对足细胞起到保护作用。
目的：觀察條件永生化的小鼠足細胞在高糖及硫辛痠榦預環境下，足細胞凋亡率及內質網應激反應（ ERS ）標誌分子半胱氨痠天鼕氨痠蛋白酶12（ Caspase-12）和葡萄糖調節蛋白78（GRP78）的錶達量，探究足細胞凋亡的髮生與內質網應激反應的關繫。方法將分化良好的足細胞隨機分為：正常葡萄糖濃度對照組（5.6 mmol/L）、甘露醇高滲對照組（25 mmol/L）、高糖組（25 mmol/L）、高糖＋硫辛痠組（25 mmol/L高糖＋500μmol/L硫辛痠）。作用48 h後，流式細胞儀測定各組足細胞凋亡率；實時定量聚閤酶鏈反應（ RT-PCR）技術檢測GRP78及Caspase-12 mRNA的錶達水平，Western blotting技術檢測GRP78及Caspase-12蛋白質錶達水平，各組之間凋亡率及GRP78與Caspase-12的mRNA與蛋白的錶達量比較採用LSD-t檢驗。結果（1）流式細胞儀檢測各組足細胞凋亡率髮現：正常葡萄糖濃度對照組足細胞凋亡率與高滲對照組足細胞凋亡率相似（ P＞0.05）；高糖組足細胞凋亡率較正常葡萄糖濃度對照組明顯升高[（14.0±1.1）％比（3.4±0.6）％，t＝9.12，P＜0.05]；高糖＋硫辛痠組足細胞的凋亡率與高糖組相比明顯降低[（14.0±1.1）％比（7.8±0.6）％，t＝7.73，P＜0.05]。（2）高糖組GRP78與Caspase-12 mRNA的錶達量與正常葡萄糖濃度對照組相比，錶達量均明顯增加（分彆為2.62±0.57比0.85±0.24，10.04±2.28比1.28±0.97， t ＝6.75、25.84，均 P ＜0.05），高糖＋硫辛痠組GRP78與Caspase-12 mRNA的錶達量與高糖組相比錶達量均明顯下降（分彆為0.82±0.22比2.62±0.57，4.98±0.55比10.04±2.28，t＝3.83、11.83，均P＜0.05）。（3）高糖組GRP78與Caspase-12蛋白錶達量與正常葡萄糖濃度對照組相比明顯增加（分彆為：2.48±0.19比0.37±0.04，2.07±0.18比0.47±0.08，t＝17.55、12.34，均P＜0.05），高糖＋硫辛痠組GRP78與Caspase-12蛋白質錶達量與高糖組相比錶達量均明顯下降（分彆為0.61±0.15比2.48±0.19，0.89±0.18比2.07±0.18，t＝4.42、3.25，均P＜0.05）。結論高糖可以通過引起內質網應激反應誘導足細胞髮生凋亡，硫辛痠可以通過減弱內質網應激反應，對足細胞起到保護作用。
목적：관찰조건영생화적소서족세포재고당급류신산간예배경하，족세포조망솔급내질망응격반응（ ERS ）표지분자반광안산천동안산단백매12（ Caspase-12）화포도당조절단백78（GRP78）적표체량，탐구족세포조망적발생여내질망응격반응적관계。방법장분화량호적족세포수궤분위：정상포도당농도대조조（5.6 mmol/L）、감로순고삼대조조（25 mmol/L）、고당조（25 mmol/L）、고당＋류신산조（25 mmol/L고당＋500μmol/L류신산）。작용48 h후，류식세포의측정각조족세포조망솔；실시정량취합매련반응（ RT-PCR）기술검측GRP78급Caspase-12 mRNA적표체수평，Western blotting기술검측GRP78급Caspase-12단백질표체수평，각조지간조망솔급GRP78여Caspase-12적mRNA여단백적표체량비교채용LSD-t검험。결과（1）류식세포의검측각조족세포조망솔발현：정상포도당농도대조조족세포조망솔여고삼대조조족세포조망솔상사（ P＞0.05）；고당조족세포조망솔교정상포도당농도대조조명현승고[（14.0±1.1）％비（3.4±0.6）％，t＝9.12，P＜0.05]；고당＋류신산조족세포적조망솔여고당조상비명현강저[（14.0±1.1）％비（7.8±0.6）％，t＝7.73，P＜0.05]。（2）고당조GRP78여Caspase-12 mRNA적표체량여정상포도당농도대조조상비，표체량균명현증가（분별위2.62±0.57비0.85±0.24，10.04±2.28비1.28±0.97， t ＝6.75、25.84，균 P ＜0.05），고당＋류신산조GRP78여Caspase-12 mRNA적표체량여고당조상비표체량균명현하강（분별위0.82±0.22비2.62±0.57，4.98±0.55비10.04±2.28，t＝3.83、11.83，균P＜0.05）。（3）고당조GRP78여Caspase-12단백표체량여정상포도당농도대조조상비명현증가（분별위：2.48±0.19비0.37±0.04，2.07±0.18비0.47±0.08，t＝17.55、12.34，균P＜0.05），고당＋류신산조GRP78여Caspase-12단백질표체량여고당조상비표체량균명현하강（분별위0.61±0.15비2.48±0.19，0.89±0.18비2.07±0.18，t＝4.42、3.25，균P＜0.05）。결론고당가이통과인기내질망응격반응유도족세포발생조망，류신산가이통과감약내질망응격반응，대족세포기도보호작용。
Objective To cultivate mice podocyte with high glucose and lipoic acid ,to observe the apoptosis rate and the change of endoplasmic reticulum stress ( ERS) marker :GRP78 and Caspase-12.To investigate the relationship between endoplasmic reticulum stress and podocyte apoptosis .Methods Already differentiated mice podocyte were divided into 4 subgroups: normal glucose concentration group , (5.6 mmol/L),mannitol hypertonic control group (25 mmol/L),high glucose group (25 mmol/L),high glucose +lipoic acid group (25 mmol/L+500μmol/L).Index and detection method:after 48 h, to detect cell apoptosis rate by flow cytometer , to detect the expression of GRP 78 and Caspase-12 mRNA with reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) technology, to detect the GRP78 and Caspase-12 protein expression with Western blotting technology.The apoptosis rate and expression of GRP 78 and Caspase-12 mRNA and protein between the groups were compared by LSD-t test.Results About cell apoptosis rate:(1) The apoptosis rate between normal glucose concentration group and hypertonic group were not statistically significant((3.4 ±0.6)%vs (3.7 ±0.9)%,t=0.52,P>0.05);The apoptosis rate of high glucose group was significantly higher than normal glucose concentration group ( ( 14.0 ±1.1 )% vs ( 3.4 ±0.6 )%, t=9.12,P<0.05);The apoptosis rate of lipoic acid +high glucose group was significantly decreased than high glucose group((14.0 ±1.1)%vs (7.8 ±0.6)%,t=7.73,P<0.05).(2)The expression of GRP78 and Caspase-12 mRNA in high glucose group increased significantly than normal glucose concentration group (2.62 ±0.57 vs 0.85 ±0.24,10.04 ±2.28 vs 1.28 ±0.97;t=6.75,25.84,all P<0.05);The expression of GRP78 and Caspase-12 mRNA in lipoic acid +high glucose group , decreased significantly than high glucose group(0.82 ±0.22 vs 2.62 ±0.57,4.98 ±0.55 vs 10.04 ±2.28,t=3.83,11.83,all P<0.05).(3) The expression of GRP78 and Caspase-12 protein in high glucose group increased significantly than normal glucose concentration group (2.48 ±0.19 vs 0.37 ±0.04,2.07 ±0.18 vs 0.47 ±0.08,t=17.55, 12.34,all P<0.05);The expression of GRP78 and Caspase-12 protein in lipoic acid +high glucose group decreased significantly than high glucose group (0.61 ±0.15 vs 2.48 ±0.19,0.89 ±0.18 vs 2.07 ±0.18, t=4.42,3.25,all P<0.05).Conclusion (1) High glucose can improve apoptosis of podocyte by the endoplasmic reticulum stress reaction.( 2 ) The lipoic acid can reduce the endoplasmic reticulum stress reaction to protect the podocyte.
