农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2014年
9期
1083-1089
,共7页
许荣%许晓磊%袁野%雷安民
許榮%許曉磊%袁野%雷安民
허영%허효뢰%원야%뢰안민
卵母细胞特异性连接组蛋白(H1foo)%猪诱导多能性干细胞(iPSCs)%电转%重编程效率
卵母細胞特異性連接組蛋白(H1foo)%豬誘導多能性榦細胞(iPSCs)%電轉%重編程效率
란모세포특이성련접조단백(H1foo)%저유도다능성간세포(iPSCs)%전전%중편정효솔
Oocyte-specific linker histone(H1foo)%Porcine induced pluripotent stem cells(iPSCs)%Electro-transferring%Reprogramming efficiency
卵母细胞特异性连接组蛋白(oocyte-specific linker histone,H1foo)是组蛋白家族的成员之一,特异性地定位于哺乳动物卵母细胞和早期胚胎中.在小鼠(Mus musculus)、牛(Bos taurus)和猪(Sus scrofa)等体外受精和体细胞核移植过程中均存在H1foo与其它成分的置换,并且这种置换有利于供核体细胞染色质构象的打开,实现基因组的完全重编程,恢复全能性.为了探索H1foo在诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的过程中对iPSCs诱导效率的影响,本研究基于对猪H1foo的已有研究积累,选取猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast cell,PFF),构建能同时表达八聚体转录因子-4(octamer-binding transcription factor-4,OCT4)、性别决定基因相关转录因子-2(SRY-related high-mobility-group(HMG)-box protein-2,SOX2)、Kruppel样转录因子(kruppel-like factor-4,KLF4)和禽髓细胞瘤病病毒原癌基因(cellular homologue of avian myelocytomatosis virus oncogene,c-MYC)四因子(OSKM)的强力毒素(doxycycline,DOX)调控载体,利用电转的方法在OSKM-PFF中瞬时表达猪pVenus-H1foo后添加DOX开启重编程,瞬时表达猪H1foo,转染得到稳定的OSKM-PFF.通过对所获得克隆进行鉴定,并对所获iPSCs克隆数进行统计分析,结果发现,转染有猪pVenus-H1foo和空载体pVenus的OSKM-PFF细胞中的碱性磷酸酶阳性克隆数目无显著差异.本研究首次证明H1foo对猪iPSCs的诱导效率无显著影响,这为进一步研究体细胞核移植与iPSCs诱导这两种重编程手段的内在机制提供了基础资料.
卵母細胞特異性連接組蛋白(oocyte-specific linker histone,H1foo)是組蛋白傢族的成員之一,特異性地定位于哺乳動物卵母細胞和早期胚胎中.在小鼠(Mus musculus)、牛(Bos taurus)和豬(Sus scrofa)等體外受精和體細胞覈移植過程中均存在H1foo與其它成分的置換,併且這種置換有利于供覈體細胞染色質構象的打開,實現基因組的完全重編程,恢複全能性.為瞭探索H1foo在誘導多能性榦細胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的過程中對iPSCs誘導效率的影響,本研究基于對豬H1foo的已有研究積纍,選取豬胎兒成纖維細胞(porcine fetal fibroblast cell,PFF),構建能同時錶達八聚體轉錄因子-4(octamer-binding transcription factor-4,OCT4)、性彆決定基因相關轉錄因子-2(SRY-related high-mobility-group(HMG)-box protein-2,SOX2)、Kruppel樣轉錄因子(kruppel-like factor-4,KLF4)和禽髓細胞瘤病病毒原癌基因(cellular homologue of avian myelocytomatosis virus oncogene,c-MYC)四因子(OSKM)的彊力毒素(doxycycline,DOX)調控載體,利用電轉的方法在OSKM-PFF中瞬時錶達豬pVenus-H1foo後添加DOX開啟重編程,瞬時錶達豬H1foo,轉染得到穩定的OSKM-PFF.通過對所穫得剋隆進行鑒定,併對所穫iPSCs剋隆數進行統計分析,結果髮現,轉染有豬pVenus-H1foo和空載體pVenus的OSKM-PFF細胞中的堿性燐痠酶暘性剋隆數目無顯著差異.本研究首次證明H1foo對豬iPSCs的誘導效率無顯著影響,這為進一步研究體細胞覈移植與iPSCs誘導這兩種重編程手段的內在機製提供瞭基礎資料.
란모세포특이성련접조단백(oocyte-specific linker histone,H1foo)시조단백가족적성원지일,특이성지정위우포유동물란모세포화조기배태중.재소서(Mus musculus)、우(Bos taurus)화저(Sus scrofa)등체외수정화체세포핵이식과정중균존재H1foo여기타성분적치환,병차저충치환유리우공핵체세포염색질구상적타개,실현기인조적완전중편정,회복전능성.위료탐색H1foo재유도다능성간세포(induced pluripotent stem cells,iPSCs)적과정중대iPSCs유도효솔적영향,본연구기우대저H1foo적이유연구적루,선취저태인성섬유세포(porcine fetal fibroblast cell,PFF),구건능동시표체팔취체전록인자-4(octamer-binding transcription factor-4,OCT4)、성별결정기인상관전록인자-2(SRY-related high-mobility-group(HMG)-box protein-2,SOX2)、Kruppel양전록인자(kruppel-like factor-4,KLF4)화금수세포류병병독원암기인(cellular homologue of avian myelocytomatosis virus oncogene,c-MYC)사인자(OSKM)적강력독소(doxycycline,DOX)조공재체,이용전전적방법재OSKM-PFF중순시표체저pVenus-H1foo후첨가DOX개계중편정,순시표체저H1foo,전염득도은정적OSKM-PFF.통과대소획득극륭진행감정,병대소획iPSCs극륭수진행통계분석,결과발현,전염유저pVenus-H1foo화공재체pVenus적OSKM-PFF세포중적감성린산매양성극륭수목무현저차이.본연구수차증명H1foo대저iPSCs적유도효솔무현저영향,저위진일보연구체세포핵이식여iPSCs유도저량충중편정수단적내재궤제제공료기출자료.
