器官移植
器官移植
기관이식
OGRAN TRANSPLANTATION
2014年
2期
107-112
,共6页
程锦涛%张英才%邓宜南%陆慧琼%张琪%杨扬
程錦濤%張英纔%鄧宜南%陸慧瓊%張琪%楊颺
정금도%장영재%산의남%륙혜경%장기%양양
癌,肝细胞%肝癌相关成纤维细胞%树突状细胞%免疫逃逸
癌,肝細胞%肝癌相關成纖維細胞%樹突狀細胞%免疫逃逸
암,간세포%간암상관성섬유세포%수돌상세포%면역도일
目的 研究肝癌相关成纤维细胞(hCAF)在单核细胞(Mo)来源树突状细胞(DC)分化过程中所起到的作用.方法 采用酶消化法从肝癌组织中分离培养获得人hCAF;采用密度梯度离心法获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),经密度梯度离心及磁珠分离法从健康人外周血浓缩白细胞中获得CD14+ Mo.hCAF-CD14+ Mo(1:10)和CD14+ Mo细胞在第1日及第4日均加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(20 ng/ml)和白细胞介素4(20 ng/ml),共诱导6d.两组细胞分为两份,一半加入脂多糖(LPS) 200 ng/ml刺激3d,另一半不加入LPS作为对照.最后细胞共分为4组:hCAF-Mo组、hCAF-Mo+ LPS组、不成熟DC (iDC)组及成熟DC (mDC)组.采用倒置荧光显微镜观察4组细胞的形态变化.各组细胞分为两部分,一部分细胞采用流式细胞术检测细胞表面分子CD83、CD80、CD1a的表达情况,另一部分细胞分别与预染CFSE的淋巴细胞共培养5d,采用流式细胞术检测T淋巴细胞增殖情况.结果 倒置显微镜结果显示在hCAF干扰下Mo不能分化为DC.CD83、CD1a、CD80的表达在iDC组分别为(3.2±0.7)％、(61.7±8.4)％、(30.1±0.9)％,mDC组分别为(80.1±2.8)％、(83.2±6.0)％、(96.1±1.9)％,hCAF-Mo组分别为(1.6±0.9)％、(1.8±0.9)％、(16.0±3.2)％,hCAF-Mo+ LPS组分别为(9.0土1.2)％、(1.1±0.4)％、(58.4±3.6)％.hCAF-Mo组与iDC组的CD1a、CD80表达差异均有统计学意义(均为P＜0.01).iDC组的CD83表达极低,因此hCAF-Mo组与iDC组的CD83表达差异没有统计学意义(P＞0.05).hCAF-Mo+LPS组与mDC组的3种表型表达差异均有统计学意义(均为P＜0.01).iDC组的T淋巴细胞增殖率为(3.3±0.9)％,mDC组为(34.5±7.3)％,hCAF-Mo组为(5.3±1.2)％,hCAF-Mo+ LPS组为(7.0±1.2)％.与iDC组相比,mDC组能有效地刺激T淋巴细胞增殖.hCAF-Mo组和hCAF-Mo+ LPS组刺激T淋巴细胞增殖的能力均较弱,与mDC组相比差异有统计学意义(均为P＜0.01).结论 hCAF可明显抑制Mo分化成DC,在肝癌的免疫逃逸过程中发挥重要的作用.
目的 研究肝癌相關成纖維細胞(hCAF)在單覈細胞(Mo)來源樹突狀細胞(DC)分化過程中所起到的作用.方法 採用酶消化法從肝癌組織中分離培養穫得人hCAF;採用密度梯度離心法穫取健康人外週血單箇覈細胞(PBMC),經密度梯度離心及磁珠分離法從健康人外週血濃縮白細胞中穫得CD14+ Mo.hCAF-CD14+ Mo(1:10)和CD14+ Mo細胞在第1日及第4日均加入粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(20 ng/ml)和白細胞介素4(20 ng/ml),共誘導6d.兩組細胞分為兩份,一半加入脂多糖(LPS) 200 ng/ml刺激3d,另一半不加入LPS作為對照.最後細胞共分為4組:hCAF-Mo組、hCAF-Mo+ LPS組、不成熟DC (iDC)組及成熟DC (mDC)組.採用倒置熒光顯微鏡觀察4組細胞的形態變化.各組細胞分為兩部分,一部分細胞採用流式細胞術檢測細胞錶麵分子CD83、CD80、CD1a的錶達情況,另一部分細胞分彆與預染CFSE的淋巴細胞共培養5d,採用流式細胞術檢測T淋巴細胞增殖情況.結果 倒置顯微鏡結果顯示在hCAF榦擾下Mo不能分化為DC.CD83、CD1a、CD80的錶達在iDC組分彆為(3.2±0.7)％、(61.7±8.4)％、(30.1±0.9)％,mDC組分彆為(80.1±2.8)％、(83.2±6.0)％、(96.1±1.9)％,hCAF-Mo組分彆為(1.6±0.9)％、(1.8±0.9)％、(16.0±3.2)％,hCAF-Mo+ LPS組分彆為(9.0土1.2)％、(1.1±0.4)％、(58.4±3.6)％.hCAF-Mo組與iDC組的CD1a、CD80錶達差異均有統計學意義(均為P＜0.01).iDC組的CD83錶達極低,因此hCAF-Mo組與iDC組的CD83錶達差異沒有統計學意義(P＞0.05).hCAF-Mo+LPS組與mDC組的3種錶型錶達差異均有統計學意義(均為P＜0.01).iDC組的T淋巴細胞增殖率為(3.3±0.9)％,mDC組為(34.5±7.3)％,hCAF-Mo組為(5.3±1.2)％,hCAF-Mo+ LPS組為(7.0±1.2)％.與iDC組相比,mDC組能有效地刺激T淋巴細胞增殖.hCAF-Mo組和hCAF-Mo+ LPS組刺激T淋巴細胞增殖的能力均較弱,與mDC組相比差異有統計學意義(均為P＜0.01).結論 hCAF可明顯抑製Mo分化成DC,在肝癌的免疫逃逸過程中髮揮重要的作用.
목적 연구간암상관성섬유세포(hCAF)재단핵세포(Mo)래원수돌상세포(DC)분화과정중소기도적작용.방법 채용매소화법종간암조직중분리배양획득인hCAF;채용밀도제도리심법획취건강인외주혈단개핵세포(PBMC),경밀도제도리심급자주분리법종건강인외주혈농축백세포중획득CD14+ Mo.hCAF-CD14+ Mo(1:10)화CD14+ Mo세포재제1일급제4일균가입립세포-거서세포집락자격인자(20 ng/ml)화백세포개소4(20 ng/ml),공유도6d.량조세포분위량빈,일반가입지다당(LPS) 200 ng/ml자격3d,령일반불가입LPS작위대조.최후세포공분위4조:hCAF-Mo조、hCAF-Mo+ LPS조、불성숙DC (iDC)조급성숙DC (mDC)조.채용도치형광현미경관찰4조세포적형태변화.각조세포분위량부분,일부분세포채용류식세포술검측세포표면분자CD83、CD80、CD1a적표체정황,령일부분세포분별여예염CFSE적림파세포공배양5d,채용류식세포술검측T림파세포증식정황.결과 도치현미경결과현시재hCAF간우하Mo불능분화위DC.CD83、CD1a、CD80적표체재iDC조분별위(3.2±0.7)％、(61.7±8.4)％、(30.1±0.9)％,mDC조분별위(80.1±2.8)％、(83.2±6.0)％、(96.1±1.9)％,hCAF-Mo조분별위(1.6±0.9)％、(1.8±0.9)％、(16.0±3.2)％,hCAF-Mo+ LPS조분별위(9.0토1.2)％、(1.1±0.4)％、(58.4±3.6)％.hCAF-Mo조여iDC조적CD1a、CD80표체차이균유통계학의의(균위P＜0.01).iDC조적CD83표체겁저,인차hCAF-Mo조여iDC조적CD83표체차이몰유통계학의의(P＞0.05).hCAF-Mo+LPS조여mDC조적3충표형표체차이균유통계학의의(균위P＜0.01).iDC조적T림파세포증식솔위(3.3±0.9)％,mDC조위(34.5±7.3)％,hCAF-Mo조위(5.3±1.2)％,hCAF-Mo+ LPS조위(7.0±1.2)％.여iDC조상비,mDC조능유효지자격T림파세포증식.hCAF-Mo조화hCAF-Mo+ LPS조자격T림파세포증식적능력균교약,여mDC조상비차이유통계학의의(균위P＜0.01).결론 hCAF가명현억제Mo분화성DC,재간암적면역도일과정중발휘중요적작용.
