基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2014年
5期
674-678
,共5页
刘玥%帅春%尹虹%宋艳斌%马文丽
劉玥%帥春%尹虹%宋豔斌%馬文麗
류모%수춘%윤홍%송염빈%마문려
miR-196b%慢病毒表达载体%载体构建
miR-196b%慢病毒錶達載體%載體構建
miR-196b%만병독표체재체%재체구건
miR-196b%lentiviral vector%vector construction
目的 构建携带miR-196b的慢病毒表达载体,为研究miR-196b在慢性粒细胞白血病中的功能及其对慢粒发生发展的作用奠定基础.方法 以人骨髓细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-196b的前体序列,慢病毒表达载体plVTHM构建重组载体plVTHM-miR-196b,并包装病毒和进行滴度测定.用病毒液感染K562细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,用流式细胞仪分选感染后绿色荧光蛋白阳性的K562细胞,再用实时荧光定量PCR测定细胞内miR-196b的表达水平.最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况.结果 成功构建了plVTHM-miR-196b慢病毒表达载体;载体中绿色荧光蛋白有较好的表达活性;与对照组细胞相比,试验组miR-196b表达水平有显著提升(P＜0.05); K562细胞稳定过表达miR-196b后增殖水平显著下降(P＜0.05).结论 成功构建了miR-196b过表达载体,并在K562细胞内稳定高表达,miR-196b有抑制K562细胞增殖的作用.
目的 構建攜帶miR-196b的慢病毒錶達載體,為研究miR-196b在慢性粒細胞白血病中的功能及其對慢粒髮生髮展的作用奠定基礎.方法 以人骨髓細胞基因組DNA為模闆,PCR法擴增miR-196b的前體序列,慢病毒錶達載體plVTHM構建重組載體plVTHM-miR-196b,併包裝病毒和進行滴度測定.用病毒液感染K562細胞,通過熒光觀察轉染效率和報告基因錶達效率,用流式細胞儀分選感染後綠色熒光蛋白暘性的K562細胞,再用實時熒光定量PCR測定細胞內miR-196b的錶達水平.最後用CCK-8法檢測各組細胞的增殖情況.結果 成功構建瞭plVTHM-miR-196b慢病毒錶達載體;載體中綠色熒光蛋白有較好的錶達活性;與對照組細胞相比,試驗組miR-196b錶達水平有顯著提升(P＜0.05); K562細胞穩定過錶達miR-196b後增殖水平顯著下降(P＜0.05).結論 成功構建瞭miR-196b過錶達載體,併在K562細胞內穩定高錶達,miR-196b有抑製K562細胞增殖的作用.
목적 구건휴대miR-196b적만병독표체재체,위연구miR-196b재만성립세포백혈병중적공능급기대만립발생발전적작용전정기출.방법 이인골수세포기인조DNA위모판,PCR법확증miR-196b적전체서렬,만병독표체재체plVTHM구건중조재체plVTHM-miR-196b,병포장병독화진행적도측정.용병독액감염K562세포,통과형광관찰전염효솔화보고기인표체효솔,용류식세포의분선감염후록색형광단백양성적K562세포,재용실시형광정량PCR측정세포내miR-196b적표체수평.최후용CCK-8법검측각조세포적증식정황.결과 성공구건료plVTHM-miR-196b만병독표체재체;재체중록색형광단백유교호적표체활성;여대조조세포상비,시험조miR-196b표체수평유현저제승(P＜0.05); K562세포은정과표체miR-196b후증식수평현저하강(P＜0.05).결론 성공구건료miR-196b과표체재체,병재K562세포내은정고표체,miR-196b유억제K562세포증식적작용.
