中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2014年
7期
5-10
,共6页
韦光辉%朱睿%刘志永%邱峰龙%张振韬%陈庭锋%张亚妮%李碧春%曹文广
韋光輝%硃睿%劉誌永%邱峰龍%張振韜%陳庭鋒%張亞妮%李碧春%曹文廣
위광휘%주예%류지영%구봉룡%장진도%진정봉%장아니%리벽춘%조문엄
Sox2基因%启动子%活性分析%5-aza-2′-deoxycytidine诱导%山羊
Sox2基因%啟動子%活性分析%5-aza-2′-deoxycytidine誘導%山羊
Sox2기인%계동자%활성분석%5-aza-2′-deoxycytidine유도%산양
Sox2 gene%promoter%activity analysis%5-aza-2′-deoxycytidine inducing%goat
本研究旨在确定徐淮山羊Sox2基因启动子区域,找出该基因启动子的核心调控区,初步探讨Sox2基因的表达调控机制.根据GenBank已公布的绵羊Sox2基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增Sox2基因的一系列启动子缺失片段,经酶切、测序及生物信息学分析,构建包含Sox2基因5′侧翼区一系列启动子缺失片段的pGL3-Sox2双荧光素酶表达载体,转染COS-7和GC1细胞,并进行5-aza--2′-deoxycytidine诱导,检测不同片段的启动子活性.结果表明:徐淮山羊Sox2基因5′侧翼区-1249-+49 bp区域的启动子活性最强(COS-7细胞),-1792-+49 bp区域活性最强(GC1细胞),-224-+49 bp区域为Sox2基因启动子基本活性区域.进一步研究发现,-484--109 bp区域存在正调控元件,-755--484 bp区域存在负调控元件.本实验通过构建包含Sox2基因启动子不同片段的重组报告基因载体并比较其转录活性,确定了Sox2基因启动子的核心区域.另外,5-aza-2′-deoxycytidine可以显著增强Sox2启动子的活性.为进一步研究Sox2基因的表达调控机制奠定了基础.
本研究旨在確定徐淮山羊Sox2基因啟動子區域,找齣該基因啟動子的覈心調控區,初步探討Sox2基因的錶達調控機製.根據GenBank已公佈的綿羊Sox2基因的啟動子序列,設計特異性PCR引物擴增Sox2基因的一繫列啟動子缺失片段,經酶切、測序及生物信息學分析,構建包含Sox2基因5′側翼區一繫列啟動子缺失片段的pGL3-Sox2雙熒光素酶錶達載體,轉染COS-7和GC1細胞,併進行5-aza--2′-deoxycytidine誘導,檢測不同片段的啟動子活性.結果錶明:徐淮山羊Sox2基因5′側翼區-1249-+49 bp區域的啟動子活性最彊(COS-7細胞),-1792-+49 bp區域活性最彊(GC1細胞),-224-+49 bp區域為Sox2基因啟動子基本活性區域.進一步研究髮現,-484--109 bp區域存在正調控元件,-755--484 bp區域存在負調控元件.本實驗通過構建包含Sox2基因啟動子不同片段的重組報告基因載體併比較其轉錄活性,確定瞭Sox2基因啟動子的覈心區域.另外,5-aza-2′-deoxycytidine可以顯著增彊Sox2啟動子的活性.為進一步研究Sox2基因的錶達調控機製奠定瞭基礎.
본연구지재학정서회산양Sox2기인계동자구역,조출해기인계동자적핵심조공구,초보탐토Sox2기인적표체조공궤제.근거GenBank이공포적면양Sox2기인적계동자서렬,설계특이성PCR인물확증Sox2기인적일계렬계동자결실편단,경매절、측서급생물신식학분석,구건포함Sox2기인5′측익구일계렬계동자결실편단적pGL3-Sox2쌍형광소매표체재체,전염COS-7화GC1세포,병진행5-aza--2′-deoxycytidine유도,검측불동편단적계동자활성.결과표명:서회산양Sox2기인5′측익구-1249-+49 bp구역적계동자활성최강(COS-7세포),-1792-+49 bp구역활성최강(GC1세포),-224-+49 bp구역위Sox2기인계동자기본활성구역.진일보연구발현,-484--109 bp구역존재정조공원건,-755--484 bp구역존재부조공원건.본실험통과구건포함Sox2기인계동자불동편단적중조보고기인재체병비교기전록활성,학정료Sox2기인계동자적핵심구역.령외,5-aza-2′-deoxycytidine가이현저증강Sox2계동자적활성.위진일보연구Sox2기인적표체조공궤제전정료기출.
