CAJ | 학술논문

目的:构建FOXP3基因3'-UTR双荧光素酶基因报告载体,并通过检测荧光素酶活性,初步分析可能调控FOXP3基因表达的miRNAs.方法:利用PCR方法,根据FOXP3基因3'-UTR序列信息设计其扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板PCR扩增FOXP3基因的3’-UTR序列,将其克隆到pmiRB-REPORT双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与FOXP3基因3’-UTR相互作用的miRNAs;利用LipofectaminTM 2000试剂将miRNAs mimics与构建好的FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶报告载体共转染于常规培养的293T细胞中,然后使用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,并与空白对照相比较.结果:经酶切及基因测序验证,成功构建含有FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体;Targetscan软件预测显示,FOXP3基因3’-UTR可能是miR 608的作用靶位点;双荧光报告显示,miR 608 mimics组比空白对照组[(0.700 0±0.016 41)比(1.000±0.055 75) (P＜0.001)] FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降30％.结论:FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体构建成功,初步证实miR 608对FOXP3有调控作用.
목적:구건FOXP3기인3'-UTR쌍형광소매기인보고재체,병통과검측형광소매활성,초보분석가능조공FOXP3기인표체적miRNAs.방법:이용PCR방법,근거FOXP3기인3'-UTR서렬신식설계기확증인물,이293T세포기인조DNA위모판PCR확증FOXP3기인적3’-UTR서렬,장기극륭도pmiRB-REPORT쌍형광소매보고재체중;운용Targetscan연건예측가능여FOXP3기인3’-UTR상호작용적miRNAs;이용LipofectaminTM 2000시제장miRNAs mimics여구건호적FOXP3기인3’-UTR단쌍형광소매보고재체공전염우상규배양적293T세포중,연후사용쌍형광소매시제합검측형광소매활성,병여공백대조상비교.결과:경매절급기인측서험증,성공구건함유FOXP3기인3’-UTR단쌍형광소매기인보고재체;Targetscan연건예측현시,FOXP3기인3’-UTR가능시miR 608적작용파위점;쌍형광보고현시,miR 608 mimics조비공백대조조[(0.700 0±0.016 41)비(1.000±0.055 75) (P＜0.001)] FOXP3기인3’-UTR쌍형광소매기인보고재체적형광소매활성하강30％.결론:FOXP3기인3’-UTR단쌍형광소매기인보고재체구건성공,초보증실miR 608대FOXP3유조공작용.