中华实用儿科临床杂志
中華實用兒科臨床雜誌
중화실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2013年
18期
1417-1421
,共5页
范志宇%李春雨%秦超毅%谢亮%王小双%高正祥%强巴措珍%王涛%余莉%刘瀚旻
範誌宇%李春雨%秦超毅%謝亮%王小雙%高正祥%彊巴措珍%王濤%餘莉%劉瀚旻
범지우%리춘우%진초의%사량%왕소쌍%고정상%강파조진%왕도%여리%류한민
磷脂酰肌醇3激酶%肺动脉平滑肌细胞%去分化%增殖
燐脂酰肌醇3激酶%肺動脈平滑肌細胞%去分化%增殖
린지선기순3격매%폐동맥평활기세포%거분화%증식
Phosphatidyl inositol 3-kinase%Pulmonary arterial vascular smooth muscle cell%Dedifferentiation%Proliferation
目的 研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)分化状态和增殖活性的调控作用.方法 体外培养雄性SD大鼠PASMC并传至第3代用于实验,将细胞分为8组:空白对照组,血小板源性生长因子(PDGF)诱导组,二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,LY294002干预组,小分子干扰RNA(siRNA)干预组,Control-siRNA对照组,空病毒对照组,重组腺病毒诱导组.用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测重组腺病毒及siRNA转染的PASMC中PI3K α调节亚基(PIK3CA)的表达情况,用Western blot检测平滑肌α肌动蛋白(α-SM actin)的表达水平,用RT-qPCR检测α-SM actin mRNA水平,用四甲基偶氮唑盐(MMT)比色实验及噻唑盐细胞计数-8(CCK-8)试剂盒检测PASMC的增殖活性.结果 重组腺病毒诱导组PASMC中PIK3CA mRNA水平高于空白对照组(P＜0.05),siRNA干预组中PIK3CA mRNA水平低于空白对照组(P＜0.05).与空白对照组相比,PDGF诱导组α-SM actin的mRNA水平和蛋白表达水平明显降低(P均＜0.05),增殖活性增高(P＜0.05),LY294002可阻断PDGF-BB诱导的α-SM actin的基因转录、蛋白表达及PASMC增殖(P＜0.05),予PIK3 CA-siRNA干预也可抑制PDGF-BB诱导的α-SM actin mRNA水平、蛋白表达水平及细胞增殖活性(P均＜0.05)；重组腺病毒诱导组α-SM actin的mRNA水平和蛋白表达水平与空白对照组相比也明显降低(P均＜0.05),增殖活性增高(P＜0.05).结论 在肺血管重构过程中,PI3K通路对大鼠PASMC去分化和细胞增殖具有正向调控作用.
目的 研究燐脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路對大鼠肺動脈平滑肌細胞(PASMC)分化狀態和增殖活性的調控作用.方法 體外培養雄性SD大鼠PASMC併傳至第3代用于實驗,將細胞分為8組:空白對照組,血小闆源性生長因子(PDGF)誘導組,二甲基亞砜(DMSO)溶劑對照組,LY294002榦預組,小分子榦擾RNA(siRNA)榦預組,Control-siRNA對照組,空病毒對照組,重組腺病毒誘導組.用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測重組腺病毒及siRNA轉染的PASMC中PI3K α調節亞基(PIK3CA)的錶達情況,用Western blot檢測平滑肌α肌動蛋白(α-SM actin)的錶達水平,用RT-qPCR檢測α-SM actin mRNA水平,用四甲基偶氮唑鹽(MMT)比色實驗及噻唑鹽細胞計數-8(CCK-8)試劑盒檢測PASMC的增殖活性.結果 重組腺病毒誘導組PASMC中PIK3CA mRNA水平高于空白對照組(P＜0.05),siRNA榦預組中PIK3CA mRNA水平低于空白對照組(P＜0.05).與空白對照組相比,PDGF誘導組α-SM actin的mRNA水平和蛋白錶達水平明顯降低(P均＜0.05),增殖活性增高(P＜0.05),LY294002可阻斷PDGF-BB誘導的α-SM actin的基因轉錄、蛋白錶達及PASMC增殖(P＜0.05),予PIK3 CA-siRNA榦預也可抑製PDGF-BB誘導的α-SM actin mRNA水平、蛋白錶達水平及細胞增殖活性(P均＜0.05)；重組腺病毒誘導組α-SM actin的mRNA水平和蛋白錶達水平與空白對照組相比也明顯降低(P均＜0.05),增殖活性增高(P＜0.05).結論 在肺血管重構過程中,PI3K通路對大鼠PASMC去分化和細胞增殖具有正嚮調控作用.
목적 연구린지선기순3격매(PI3K)통로대대서폐동맥평활기세포(PASMC)분화상태화증식활성적조공작용.방법 체외배양웅성SD대서PASMC병전지제3대용우실험,장세포분위8조:공백대조조,혈소판원성생장인자(PDGF)유도조,이갑기아풍(DMSO)용제대조조,LY294002간예조,소분자간우RNA(siRNA)간예조,Control-siRNA대조조,공병독대조조,중조선병독유도조.용실시형광정량PCR(RT-qPCR)검측중조선병독급siRNA전염적PASMC중PI3K α조절아기(PIK3CA)적표체정황,용Western blot검측평활기α기동단백(α-SM actin)적표체수평,용RT-qPCR검측α-SM actin mRNA수평,용사갑기우담서염(MMT)비색실험급새서염세포계수-8(CCK-8)시제합검측PASMC적증식활성.결과 중조선병독유도조PASMC중PIK3CA mRNA수평고우공백대조조(P＜0.05),siRNA간예조중PIK3CA mRNA수평저우공백대조조(P＜0.05).여공백대조조상비,PDGF유도조α-SM actin적mRNA수평화단백표체수평명현강저(P균＜0.05),증식활성증고(P＜0.05),LY294002가조단PDGF-BB유도적α-SM actin적기인전록、단백표체급PASMC증식(P＜0.05),여PIK3 CA-siRNA간예야가억제PDGF-BB유도적α-SM actin mRNA수평、단백표체수평급세포증식활성(P균＜0.05)；중조선병독유도조α-SM actin적mRNA수평화단백표체수평여공백대조조상비야명현강저(P균＜0.05),증식활성증고(P＜0.05).결론 재폐혈관중구과정중,PI3K통로대대서PASMC거분화화세포증식구유정향조공작용.
