安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
18期
7832-7835,7885
,共5页
陈文波%邵方元%刘晓%王一飞%刘忠
陳文波%邵方元%劉曉%王一飛%劉忠
진문파%소방원%류효%왕일비%류충
硫氧还蛋白还原酶%纯化
硫氧還蛋白還原酶%純化
류양환단백환원매%순화
Thioredoxin reductase%Purification
[目的]用新的方法从猪脑中提取纯化硫氧还蛋白还原酶(TrxR)并对其进行表征.[方法]通过硫酸铵盐析、DEAE-SepharoseFast Flow弱阴离子交换凝胶色谱柱层析、Blue-Sepharose亲和色谱柱层析、Resource Q强阴离子交换色谱柱层析和Superdex 200 prepgrade凝胶过滤色谱柱层析等方法,从猪脑中分离并纯化TrxR.采用聚丙烯酰胺电泳法、等电聚焦法、DTNB还原法和胰岛素还原法对TrxR的性质进行表征.[结果]从猪脑中分离并纯化出TrxR,其纯度大于99％,是酶粗提液的6 000倍,最终产率为13.9％.猪脑TrxR的分子量为56.0 kD,等电点为5.0.以DTNB为底物测得其Km和kcat值分别为62.9 μmol/L和467 min-1,以硫氧还蛋白为底物测得其Km和kcat值分别为3.9μmol/L和2 813 min-1.[结论]用新的方法从猪脑中纯化得到较高纯度的TrxR,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础.
[目的]用新的方法從豬腦中提取純化硫氧還蛋白還原酶(TrxR)併對其進行錶徵.[方法]通過硫痠銨鹽析、DEAE-SepharoseFast Flow弱陰離子交換凝膠色譜柱層析、Blue-Sepharose親和色譜柱層析、Resource Q彊陰離子交換色譜柱層析和Superdex 200 prepgrade凝膠過濾色譜柱層析等方法,從豬腦中分離併純化TrxR.採用聚丙烯酰胺電泳法、等電聚焦法、DTNB還原法和胰島素還原法對TrxR的性質進行錶徵.[結果]從豬腦中分離併純化齣TrxR,其純度大于99％,是酶粗提液的6 000倍,最終產率為13.9％.豬腦TrxR的分子量為56.0 kD,等電點為5.0.以DTNB為底物測得其Km和kcat值分彆為62.9 μmol/L和467 min-1,以硫氧還蛋白為底物測得其Km和kcat值分彆為3.9μmol/L和2 813 min-1.[結論]用新的方法從豬腦中純化得到較高純度的TrxR,為進一步研究該蛋白的結構和功能奠定瞭基礎.
[목적]용신적방법종저뇌중제취순화류양환단백환원매(TrxR)병대기진행표정.[방법]통과류산안염석、DEAE-SepharoseFast Flow약음리자교환응효색보주층석、Blue-Sepharose친화색보주층석、Resource Q강음리자교환색보주층석화Superdex 200 prepgrade응효과려색보주층석등방법,종저뇌중분리병순화TrxR.채용취병희선알전영법、등전취초법、DTNB환원법화이도소환원법대TrxR적성질진행표정.[결과]종저뇌중분리병순화출TrxR,기순도대우99％,시매조제액적6 000배,최종산솔위13.9％.저뇌TrxR적분자량위56.0 kD,등전점위5.0.이DTNB위저물측득기Km화kcat치분별위62.9 μmol/L화467 min-1,이류양환단백위저물측득기Km화kcat치분별위3.9μmol/L화2 813 min-1.[결론]용신적방법종저뇌중순화득도교고순도적TrxR,위진일보연구해단백적결구화공능전정료기출.
