安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
18期
7742-7744,7977
,共4页
余美华%张姝芳%倪晓敏%袁进强%胡巧玲%万文彬%杨仙玉
餘美華%張姝芳%倪曉敏%袁進彊%鬍巧玲%萬文彬%楊仙玉
여미화%장주방%예효민%원진강%호교령%만문빈%양선옥
MCL-1%原核表达载体%重组蛋白表达
MCL-1%原覈錶達載體%重組蛋白錶達
MCL-1%원핵표체재체%중조단백표체
MCL-1%Prokaryotic expression vector%Recombinant protein expression
[目的]构建日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1)的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达.[方法]通过PCR方法扩增日本蟾蜍皮肤mcl-1开放阅读框,将其插入到原核表达载体pET-28b中.经菌落PCR、DNA限制性内切酶消化筛选阳性克隆,并通过DNA测序确定原核表达载体pET-28 b-mcl-1构建成功.将pET-28b-mcl-1转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE对重组蛋白的表达进行检测.[结果]原核表达载体pET-28b-mcl-1构建成功;重组蛋白在大肠杆菌中成功表达.[结论]原核表达载体的构建及重组蛋白的表达,为后续MCL-1的纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定了基础.
[目的]構建日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)髓細胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1)的原覈錶達載體併誘導其重組蛋白錶達.[方法]通過PCR方法擴增日本蟾蜍皮膚mcl-1開放閱讀框,將其插入到原覈錶達載體pET-28b中.經菌落PCR、DNA限製性內切酶消化篩選暘性剋隆,併通過DNA測序確定原覈錶達載體pET-28 b-mcl-1構建成功.將pET-28b-mcl-1轉入大腸桿菌(E.coli)感受態細胞BL21(DE3)中,用IPTG誘導錶達,併用SDS-PAGE對重組蛋白的錶達進行檢測.[結果]原覈錶達載體pET-28b-mcl-1構建成功;重組蛋白在大腸桿菌中成功錶達.[結論]原覈錶達載體的構建及重組蛋白的錶達,為後續MCL-1的純化、抗血清的製備及生理功能檢測奠定瞭基礎.
[목적]구건일본섬서(Bufo japonicus formosus)수세포백혈병기인-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1)적원핵표체재체병유도기중조단백표체.[방법]통과PCR방법확증일본섬서피부mcl-1개방열독광,장기삽입도원핵표체재체pET-28b중.경균락PCR、DNA한제성내절매소화사선양성극륭,병통과DNA측서학정원핵표체재체pET-28 b-mcl-1구건성공.장pET-28b-mcl-1전입대장간균(E.coli)감수태세포BL21(DE3)중,용IPTG유도표체,병용SDS-PAGE대중조단백적표체진행검측.[결과]원핵표체재체pET-28b-mcl-1구건성공;중조단백재대장간균중성공표체.[결론]원핵표체재체적구건급중조단백적표체,위후속MCL-1적순화、항혈청적제비급생리공능검측전정료기출.
