CAJ | 학술논문

目的:利用自主知识产权抗体3E1,确定RTB与细胞特异性结合的活性肽部位,基因工程合成后,动物实验评价绿色荧光蛋白在基于RTB活性肽靶向下在体内的分布,为后续研究奠定基础.方法:用生物信息学技术,确定RTB与细胞特异性结合的活性肽部位;分子克隆技术构建含不同肽的绿色荧光蛋白原核表达载体,实现肽-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达;动物实验评价小鼠舌下口服肽-GFP融合蛋白后GFP在体内的分布.结果:建立了自主知识产权单抗3E1与RTB相互作用的空间构象,判定出四个活性区域,构建了4个含不同活性肽的GFP原核表达载体,获得了高纯度蛋白;经舌下口服免疫BALB/c小鼠后,免疫组化和流式细胞术证实,P1-GFP免疫组GFP和CD11c在不同组织中的分布与对照组有明显区别.P1-GFP初次免疫后,GFP主要分布于空肠,再次免疫后,GFP主要集中于回肠、肠相关淋巴组织和小肠PP结;初次免疫后CD11c+细胞主要分布于肠系膜淋巴结,胃和空肠,再次免疫后肠系膜淋巴结中的CD11c+细胞不再占优势,空肠中CD11c+细胞明显增加.结论:基于RTB的活性肽P1与GFP融合蛋白口服免疫小鼠后,P1-GFP经P1肽的导向,初次和再次免疫后GFP在体内的分布不同,再次免疫后范围更广.P1的导向使GFP直接进入小肠PP结和肠系膜淋巴结两个黏膜免疫应答的主要诱导及效应部位,利于免疫应答的发生.
목적:이용자주지식산권항체3E1,학정RTB여세포특이성결합적활성태부위,기인공정합성후,동물실험평개록색형광단백재기우RTB활성태파향하재체내적분포,위후속연구전정기출.방법:용생물신식학기술,학정RTB여세포특이성결합적활성태부위;분자극륭기술구건함불동태적록색형광단백원핵표체재체,실현태-GFP융합단백재대장간균중적고효、가용성표체;동물실험평개소서설하구복태-GFP융합단백후GFP재체내적분포.결과:건립료자주지식산권단항3E1여RTB상호작용적공간구상,판정출사개활성구역,구건료4개함불동활성태적GFP원핵표체재체,획득료고순도단백;경설하구복면역BALB/c소서후,면역조화화류식세포술증실,P1-GFP면역조GFP화CD11c재불동조직중적분포여대조조유명현구별.P1-GFP초차면역후,GFP주요분포우공장,재차면역후,GFP주요집중우회장、장상관림파조직화소장PP결;초차면역후CD11c+세포주요분포우장계막림파결,위화공장,재차면역후장계막림파결중적CD11c+세포불재점우세,공장중CD11c+세포명현증가.결론:기우RTB적활성태P1여GFP융합단백구복면역소서후,P1-GFP경P1태적도향,초차화재차면역후GFP재체내적분포불동,재차면역후범위경엄.P1적도향사GFP직접진입소장PP결화장계막림파결량개점막면역응답적주요유도급효응부위,리우면역응답적발생.