中国生物医学工程学报
中國生物醫學工程學報
중국생물의학공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOMEDICAL ENGINEERING
2014年
3期
329-334
,共6页
刘新%韦新桂%高宇辉%王恒
劉新%韋新桂%高宇輝%王恆
류신%위신계%고우휘%왕항
恶性疟原虫%蛋白疫苗%中试发酵%免疫原性
噁性瘧原蟲%蛋白疫苗%中試髮酵%免疫原性
악성학원충%단백역묘%중시발효%면역원성
plasmodium falciparum%protein vaccine%pilot scale fermentation%immunogenicity
中试规模高效制备恶性疟原虫多表位人工随机重组疫苗M.RCAg-1,并对其免疫原性进行鉴定.20 L培养基规模发酵培养M.RCAg-1的工程菌,产物经高压匀浆破碎后,通过镍琼脂糖凝胶FF层析和琼葡糖凝胶G200HP层析两步分离纯化获得中试M.RCAg-1.将15只BALB/c小鼠随机地平均分为3组(弗氏佐剂组、中试M.RCAg-1与弗氏佐剂配伍组和小试M.RCAg-1与弗氏佐剂配伍组)进行皮下免疫,利用间接Elisa和间接免疫荧光(IFA)技术对3次免疫后小鼠血清中的特异性抗体进行分析.IPTG诱导4h后发酵结束,菌体产量25 g/L,M.RCAg-1约占菌体总蛋白的24％;经两步柱层析分离纯化后,目的蛋白纯度大于95％,回收率高达53.2％;与弗氏佐剂对照组相比,中试M.RCAg-1和小试M.RCAg-1都能在小鼠体内诱生高水平的特异性抗体应答,其抗体滴度均可达到1∶1 024 000.与此同时,两实验组鼠血清抗体的对疟原虫天然抗原都有识别,其识别水平并无差异(P＞0.05).本研究成功地高效制备出多表位人工随机重组疫苗M.RCAg-1,并在小鼠体内证实其具有良好的免疫原性,为随后进行的M.RCAg-1的临床前研究奠定基础.
中試規模高效製備噁性瘧原蟲多錶位人工隨機重組疫苗M.RCAg-1,併對其免疫原性進行鑒定.20 L培養基規模髮酵培養M.RCAg-1的工程菌,產物經高壓勻漿破碎後,通過鎳瓊脂糖凝膠FF層析和瓊葡糖凝膠G200HP層析兩步分離純化穫得中試M.RCAg-1.將15隻BALB/c小鼠隨機地平均分為3組(弗氏佐劑組、中試M.RCAg-1與弗氏佐劑配伍組和小試M.RCAg-1與弗氏佐劑配伍組)進行皮下免疫,利用間接Elisa和間接免疫熒光(IFA)技術對3次免疫後小鼠血清中的特異性抗體進行分析.IPTG誘導4h後髮酵結束,菌體產量25 g/L,M.RCAg-1約佔菌體總蛋白的24％;經兩步柱層析分離純化後,目的蛋白純度大于95％,迴收率高達53.2％;與弗氏佐劑對照組相比,中試M.RCAg-1和小試M.RCAg-1都能在小鼠體內誘生高水平的特異性抗體應答,其抗體滴度均可達到1∶1 024 000.與此同時,兩實驗組鼠血清抗體的對瘧原蟲天然抗原都有識彆,其識彆水平併無差異(P＞0.05).本研究成功地高效製備齣多錶位人工隨機重組疫苗M.RCAg-1,併在小鼠體內證實其具有良好的免疫原性,為隨後進行的M.RCAg-1的臨床前研究奠定基礎.
중시규모고효제비악성학원충다표위인공수궤중조역묘M.RCAg-1,병대기면역원성진행감정.20 L배양기규모발효배양M.RCAg-1적공정균,산물경고압균장파쇄후,통과얼경지당응효FF층석화경포당응효G200HP층석량보분리순화획득중시M.RCAg-1.장15지BALB/c소서수궤지평균분위3조(불씨좌제조、중시M.RCAg-1여불씨좌제배오조화소시M.RCAg-1여불씨좌제배오조)진행피하면역,이용간접Elisa화간접면역형광(IFA)기술대3차면역후소서혈청중적특이성항체진행분석.IPTG유도4h후발효결속,균체산량25 g/L,M.RCAg-1약점균체총단백적24％;경량보주층석분리순화후,목적단백순도대우95％,회수솔고체53.2％;여불씨좌제대조조상비,중시M.RCAg-1화소시M.RCAg-1도능재소서체내유생고수평적특이성항체응답,기항체적도균가체도1∶1 024 000.여차동시,량실험조서혈청항체적대학원충천연항원도유식별,기식별수평병무차이(P＞0.05).본연구성공지고효제비출다표위인공수궤중조역묘M.RCAg-1,병재소서체내증실기구유량호적면역원성,위수후진행적M.RCAg-1적림상전연구전정기출.
