南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
8期
1377-1381
,共5页
彭广南%蒋钦杨%王晶%郭亚芬%兰干球%蒋和生
彭廣南%蔣欽楊%王晶%郭亞芬%蘭榦毬%蔣和生
팽엄남%장흠양%왕정%곽아분%란간구%장화생
广西三黄鸡%PPARγ基因%克隆%同源性%实时荧光定量PCR%溶解曲线
廣西三黃鷄%PPARγ基因%剋隆%同源性%實時熒光定量PCR%溶解麯線
엄서삼황계%PPARγ기인%극륭%동원성%실시형광정량PCR%용해곡선
Guangxi Sanhuang chicken%PPARγ gene%clone%homology%qRT-PCR%solubility curve
[目的]克隆广西三黄鸡过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因,建立该基因的实时荧光定量PCR,为后续开展广西三黄鸡PPARγ基因组织表达谱及品种间表达差异研究奠定基础.[方法]根据GenBank已公布的鸡PPARγ基因序列保守区域,用Oligo 6.0软件设计合成1对引物,以广西三黄鸡脂肪总RNA为模板,用RT-PCR从广西三黄鸡克隆PPARγ基因.以携带PPAR γ基因片段的重组质粒为标准品,建立基于SYBR Green Ⅰ染料法的实时荧光定量PCR标准曲线.[结果]广西三黄鸡PPARγ基因的编码区序列(CDS)长1428 bp,编码475个氨基酸;与GenBank已公布的鸡PPARγ基因(AF163811)参考序列比对,其同源性为99.7％,存在4个位点碱基突变,但均为无义突变.广西三黄鸡PPARγ基因的实时荧光定量PCR标准曲线方程为:y=-3.568x+28.50,扩增效率为1.907,实时荧光定量PCR扩增产物的溶解曲线峰单一.[结论]鸡PPARγ基因在进化中比较保守;建立的广西三黄鸡PPARγ基因实时荧光定量PCR是可行的.
[目的]剋隆廣西三黃鷄過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)基因,建立該基因的實時熒光定量PCR,為後續開展廣西三黃鷄PPARγ基因組織錶達譜及品種間錶達差異研究奠定基礎.[方法]根據GenBank已公佈的鷄PPARγ基因序列保守區域,用Oligo 6.0軟件設計閤成1對引物,以廣西三黃鷄脂肪總RNA為模闆,用RT-PCR從廣西三黃鷄剋隆PPARγ基因.以攜帶PPAR γ基因片段的重組質粒為標準品,建立基于SYBR Green Ⅰ染料法的實時熒光定量PCR標準麯線.[結果]廣西三黃鷄PPARγ基因的編碼區序列(CDS)長1428 bp,編碼475箇氨基痠;與GenBank已公佈的鷄PPARγ基因(AF163811)參攷序列比對,其同源性為99.7％,存在4箇位點堿基突變,但均為無義突變.廣西三黃鷄PPARγ基因的實時熒光定量PCR標準麯線方程為:y=-3.568x+28.50,擴增效率為1.907,實時熒光定量PCR擴增產物的溶解麯線峰單一.[結論]鷄PPARγ基因在進化中比較保守;建立的廣西三黃鷄PPARγ基因實時熒光定量PCR是可行的.
[목적]극륭엄서삼황계과양화물매체증식물격활수체γ(PPARγ)기인,건립해기인적실시형광정량PCR,위후속개전엄서삼황계PPARγ기인조직표체보급품충간표체차이연구전정기출.[방법]근거GenBank이공포적계PPARγ기인서렬보수구역,용Oligo 6.0연건설계합성1대인물,이엄서삼황계지방총RNA위모판,용RT-PCR종엄서삼황계극륭PPARγ기인.이휴대PPAR γ기인편단적중조질립위표준품,건립기우SYBR Green Ⅰ염료법적실시형광정량PCR표준곡선.[결과]엄서삼황계PPARγ기인적편마구서렬(CDS)장1428 bp,편마475개안기산;여GenBank이공포적계PPARγ기인(AF163811)삼고서렬비대,기동원성위99.7％,존재4개위점감기돌변,단균위무의돌변.엄서삼황계PPARγ기인적실시형광정량PCR표준곡선방정위:y=-3.568x+28.50,확증효솔위1.907,실시형광정량PCR확증산물적용해곡선봉단일.[결론]계PPARγ기인재진화중비교보수;건립적엄서삼황계PPARγ기인실시형광정량PCR시가행적.
