中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
9期
733-737
,共5页
王莉%黄安宁%李槿年%张丹俊%刘雪兰
王莉%黃安寧%李槿年%張丹俊%劉雪蘭
왕리%황안저%리근년%장단준%류설란
J亚群禽白血病病毒%SYBR Green Ⅰ%荧光定量PCR%病毒基因表达水平
J亞群禽白血病病毒%SYBR Green Ⅰ%熒光定量PCR%病毒基因錶達水平
J아군금백혈병병독%SYBR Green Ⅰ%형광정량PCR%병독기인표체수평
J subgroup of avian leukosis virus%SYBR Green Ⅰ%fluorescent quantitative PCR%transcripts expression levels of ALV-J gene
为建立一种能够快速、灵敏和特异地检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3′端与gp85编码基因之间的保守区域(5 258 bp~5 802 bp)为检测目的片段,构建重组质粒并作为靶基因,通过对其浓度、引物浓度和退火温度的优化,建立了ALV-J SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.结果显示该方法的最低检测限度为2.36×102拷贝/μL,比普通PCR高100倍;与其他禽源病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于5%.表明本研究建立的方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性.采用该方法对100只临床病鸡进行检测,ALV的检出率为44%.随机选择10只感染阳性鸡,检测病毒基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的分布与表达水平,结果表明ALV-J在各主要脏器中均有分布,但以肾脏中的病毒表达量最高.
為建立一種能夠快速、靈敏和特異地檢測J亞群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3′耑與gp85編碼基因之間的保守區域(5 258 bp~5 802 bp)為檢測目的片段,構建重組質粒併作為靶基因,通過對其濃度、引物濃度和退火溫度的優化,建立瞭ALV-J SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR方法.結果顯示該方法的最低檢測限度為2.36×102拷貝/μL,比普通PCR高100倍;與其他禽源病毒無交扠反應;批內和批間變異繫數均小于5%.錶明本研究建立的方法具有良好的特異性、穩定性和靈敏性.採用該方法對100隻臨床病鷄進行檢測,ALV的檢齣率為44%.隨機選擇10隻感染暘性鷄,檢測病毒基因在心髒、肝髒、脾髒、肺髒和腎髒中的分佈與錶達水平,結果錶明ALV-J在各主要髒器中均有分佈,但以腎髒中的病毒錶達量最高.
위건립일충능구쾌속、령민화특이지검측J아군금백혈병병독(ALV-J)적SYBR Green Ⅰ형광정량PCR방법,본연구이ALV-J원형병독주HPRS-103적pol기인3′단여gp85편마기인지간적보수구역(5 258 bp~5 802 bp)위검측목적편단,구건중조질립병작위파기인,통과대기농도、인물농도화퇴화온도적우화,건립료ALV-J SYBR Green Ⅰ형광정량PCR방법.결과현시해방법적최저검측한도위2.36×102고패/μL,비보통PCR고100배;여기타금원병독무교차반응;비내화비간변이계수균소우5%.표명본연구건립적방법구유량호적특이성、은정성화령민성.채용해방법대100지림상병계진행검측,ALV적검출솔위44%.수궤선택10지감염양성계,검측병독기인재심장、간장、비장、폐장화신장중적분포여표체수평,결과표명ALV-J재각주요장기중균유분포,단이신장중적병독표체량최고.