中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
9期
707-710
,共4页
廖亚金%李素%贺番%何文瑞%董泓%冯烁%孙元%仇华吉
廖亞金%李素%賀番%何文瑞%董泓%馮爍%孫元%仇華吉
료아금%리소%하번%하문서%동홍%풍삭%손원%구화길
猪瘟病毒%PBMC%cDNA文库%酵母双杂交%E2蛋白
豬瘟病毒%PBMC%cDNA文庫%酵母雙雜交%E2蛋白
저온병독%PBMC%cDNA문고%효모쌍잡교%E2단백
classical swine fever virus%PBMC%cDNA library%yeast two-hybrid assay%E2 protein
为研究猪瘟病-毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA.纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库.以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证.结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础.
為研究豬瘟病-毒(CSFV)蛋白與宿主細胞蛋白之間的相互作用,本研究通過SMART技術閤成豬外週血單箇覈細胞(PBMC)雙鏈cDNA,以攜帶與載體pGADT7-Rec重組位點同源序列的特異引物經long-distance PCR擴增雙鏈cDNA.純化雙鏈cDNA併與載體pGADT7-Rec共轉化酵母菌株Y187,經同源重組構建PBMC cDNA酵母錶達文庫.以CSFV E2蛋白為誘餌進行酵母雙雜交篩選,得到暘性剋隆根據序列比對分析結果,進一步進行共轉化驗證.結果顯示篩選到17箇與CSFV E2蛋白相互作用的宿主細胞蛋白,基因註釋(GO)分析錶明這些蛋白分彆參與免疫、代謝、細胞生長與增殖、生物調節等過程,為研究它們與CSFV E2的相互作用奠定瞭基礎.
위연구저온병-독(CSFV)단백여숙주세포단백지간적상호작용,본연구통과SMART기술합성저외주혈단개핵세포(PBMC)쌍련cDNA,이휴대여재체pGADT7-Rec중조위점동원서렬적특이인물경long-distance PCR확증쌍련cDNA.순화쌍련cDNA병여재체pGADT7-Rec공전화효모균주Y187,경동원중조구건PBMC cDNA효모표체문고.이CSFV E2단백위유이진행효모쌍잡교사선,득도양성극륭근거서렬비대분석결과,진일보진행공전화험증.결과현시사선도17개여CSFV E2단백상호작용적숙주세포단백,기인주석(GO)분석표명저사단백분별삼여면역、대사、세포생장여증식、생물조절등과정,위연구타문여CSFV E2적상호작용전정료기출.
