中华脑科疾病与康复杂志（电子版）
中華腦科疾病與康複雜誌（電子版）
중화뇌과질병여강복잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF BRAIN DI8SEASES AND REHABILITATIN(ELECTRONIC EDITION)
2012年
6期
317-324
,共8页
魏丹%李彤%李莉%张平%李合华%宋志秀%闫海清%常利
魏丹%李彤%李莉%張平%李閤華%宋誌秀%閆海清%常利
위단%리동%리리%장평%리합화%송지수%염해청%상리
脑膜间皮细胞%转染%细胞增殖%细胞迁移%肝细胞生长因子%腺病毒,介导,人
腦膜間皮細胞%轉染%細胞增殖%細胞遷移%肝細胞生長因子%腺病毒,介導,人
뇌막간피세포%전염%세포증식%세포천이%간세포생장인자%선병독,개도,인
目的 观察腺病毒介导的人肝细胞生长因子(Ad-HGF)对大鼠脑膜间皮细胞(RMMC)的转染效率及增殖和迁移效应.方法 原代培养RMMC并鉴定;携带增强型GFP基因的腺病毒载体(Ad5-EGFP)转染RMMC,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染细胞的最佳转染强度(MOI);酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测不同转染强度(25、50、100及200 PFU/细胞)Ad-HGF转染RMMC后上清液中肝细胞生长因子(HGF)的表达;ELISA法检测不同时间点(0、2、4、6、8、10、12及14 d)上清液中HGF的表达;MTT法检测不同体积百分数(0%、25%、50%、75%、100%)表达上清对细胞的增殖效应;Transwells法和划痕实验检测表达上清对细胞的迁移效应.应用曲线拟合完成直线回归方程,两样本均数比较采用独立样本t检验,多组间比较选用单因素方差分析.结果 体外成功培养并鉴定RMMC;Ad5-EGFP转染细胞MOI为200 PFU/细胞,转染效率高达96.21%;上清液中HGF的表达随MOI增加而增加,且呈一定浓度依赖性,差异有显著性(F=407.851,P<0.05),MOI=200 PFU/细胞时,HGF表达量为(97.275±3.035)ng/ml;HGF表达量呈一定时间依赖性,差异有统计学意义(F=384.063,P<0.05),转染后48 h达高峰,峰值为(104.275±2.356)ng/ml,随后下降,10 d下降明显,随后保持相对稳定水平;表达上清对RMMC有明显促增殖效应,且呈一定浓度依赖性,差异有统计学意义(F=285.946,P<0.05);表达上清对RMMC有促迁移效应,差异有统计学意义(t=34.135,P<0.05).结论 Ad-HGF可高效转染大鼠脑膜间皮细胞并在细胞中表达,表达上清对细胞有明显促增殖和促迁移效应.
目的 觀察腺病毒介導的人肝細胞生長因子(Ad-HGF)對大鼠腦膜間皮細胞(RMMC)的轉染效率及增殖和遷移效應.方法 原代培養RMMC併鑒定;攜帶增彊型GFP基因的腺病毒載體(Ad5-EGFP)轉染RMMC,通過熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測其轉染細胞的最佳轉染彊度(MOI);酶聯免疫吸附測定(ELISA)法檢測不同轉染彊度(25、50、100及200 PFU/細胞)Ad-HGF轉染RMMC後上清液中肝細胞生長因子(HGF)的錶達;ELISA法檢測不同時間點(0、2、4、6、8、10、12及14 d)上清液中HGF的錶達;MTT法檢測不同體積百分數(0%、25%、50%、75%、100%)錶達上清對細胞的增殖效應;Transwells法和劃痕實驗檢測錶達上清對細胞的遷移效應.應用麯線擬閤完成直線迴歸方程,兩樣本均數比較採用獨立樣本t檢驗,多組間比較選用單因素方差分析.結果 體外成功培養併鑒定RMMC;Ad5-EGFP轉染細胞MOI為200 PFU/細胞,轉染效率高達96.21%;上清液中HGF的錶達隨MOI增加而增加,且呈一定濃度依賴性,差異有顯著性(F=407.851,P<0.05),MOI=200 PFU/細胞時,HGF錶達量為(97.275±3.035)ng/ml;HGF錶達量呈一定時間依賴性,差異有統計學意義(F=384.063,P<0.05),轉染後48 h達高峰,峰值為(104.275±2.356)ng/ml,隨後下降,10 d下降明顯,隨後保持相對穩定水平;錶達上清對RMMC有明顯促增殖效應,且呈一定濃度依賴性,差異有統計學意義(F=285.946,P<0.05);錶達上清對RMMC有促遷移效應,差異有統計學意義(t=34.135,P<0.05).結論 Ad-HGF可高效轉染大鼠腦膜間皮細胞併在細胞中錶達,錶達上清對細胞有明顯促增殖和促遷移效應.
목적 관찰선병독개도적인간세포생장인자(Ad-HGF)대대서뇌막간피세포(RMMC)적전염효솔급증식화천이효응.방법 원대배양RMMC병감정;휴대증강형GFP기인적선병독재체(Ad5-EGFP)전염RMMC,통과형광현미경화류식세포의검측기전염세포적최가전염강도(MOI);매련면역흡부측정(ELISA)법검측불동전염강도(25、50、100급200 PFU/세포)Ad-HGF전염RMMC후상청액중간세포생장인자(HGF)적표체;ELISA법검측불동시간점(0、2、4、6、8、10、12급14 d)상청액중HGF적표체;MTT법검측불동체적백분수(0%、25%、50%、75%、100%)표체상청대세포적증식효응;Transwells법화화흔실험검측표체상청대세포적천이효응.응용곡선의합완성직선회귀방정,량양본균수비교채용독립양본t검험,다조간비교선용단인소방차분석.결과 체외성공배양병감정RMMC;Ad5-EGFP전염세포MOI위200 PFU/세포,전염효솔고체96.21%;상청액중HGF적표체수MOI증가이증가,차정일정농도의뢰성,차이유현저성(F=407.851,P<0.05),MOI=200 PFU/세포시,HGF표체량위(97.275±3.035)ng/ml;HGF표체량정일정시간의뢰성,차이유통계학의의(F=384.063,P<0.05),전염후48 h체고봉,봉치위(104.275±2.356)ng/ml,수후하강,10 d하강명현,수후보지상대은정수평;표체상청대RMMC유명현촉증식효응,차정일정농도의뢰성,차이유통계학의의(F=285.946,P<0.05);표체상청대RMMC유촉천이효응,차이유통계학의의(t=34.135,P<0.05).결론 Ad-HGF가고효전염대서뇌막간피세포병재세포중표체,표체상청대세포유명현촉증식화촉천이효응.
