CAJ | 학술논문

采用2轮 PCR 扩增获得新城疫病毒疫苗株 LaSota 和强毒株 GM V 和 W 基因全长，分别克隆到pMD19-T 载体上，然后亚克隆到真核表达载体 pEGFP-N1，重组质粒经过酶切， PCR 鉴定及测序，筛选出阳性重组质粒，分别命名为 pEGFP-La V 、 pEGFP-La W 、 pEGFP-GM V 和 pEGFP-GM W 。将各重组质粒分别转染到 DF-1细胞，于转染后12、24h 和36h 在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白 GFP 在细胞中的表达情况。结果显示，各质粒转染 DF-1细胞后在12h 就可以见到绿色荧光蛋白，随着时间的延长，绿色荧光蛋白荧光强度增加，到36h 后达到最强，而对照组始终没有见到 GFP 蛋白的表达，表明在转染的阳性细胞中融合蛋白 pEGFP-La V 、 pEGFP-La W 、 pEGFP-GM V 和 pEGFP-GM W 均能够有效的表达，该结果为新城疫病毒 V 和 W 基因的功能研究奠定了基础。
채용2륜 PCR 확증획득신성역병독역묘주 LaSota 화강독주 GM V 화 W 기인전장，분별극륭도pMD19-T 재체상，연후아극륭도진핵표체재체 pEGFP-N1，중조질립경과매절， PCR 감정급측서，사선출양성중조질립，분별명명위 pEGFP-La V 、 pEGFP-La W 、 pEGFP-GM V 화 pEGFP-GM W 。장각중조질립분별전염도 DF-1세포，우전염후12、24h 화36h 재형광도치현미경하관찰록색형광단백 GFP 재세포중적표체정황。결과현시，각질립전염 DF-1세포후재12h 취가이견도록색형광단백，수착시간적연장，록색형광단백형광강도증가，도36h 후체도최강，이대조조시종몰유견도 GFP 단백적표체，표명재전염적양성세포중융합단백 pEGFP-La V 、 pEGFP-La W 、 pEGFP-GM V 화 pEGFP-GM W 균능구유효적표체，해결과위신성역병독 V 화 W 기인적공능연구전정료기출。