药学实践杂志
藥學實踐雜誌
약학실천잡지
THE JOURNAL OF PHARMACEUTICAL PRACTICE
2013年
5期
347-350
,共4页
RPS3a%腺病毒%构建%表达
RPS3a%腺病毒%構建%錶達
RPS3a%선병독%구건%표체
RPS3a%adenovirus%construction%expression
目的 构建核糖体蛋白RPS3a的腺病毒表达载体,并进一步验证其在细胞中的表达.方法 应用RT-PCR从人胚肾HEK293细胞的总RNA中反转录并扩增出RPS3a基因,并将RPS3a亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,酶切及测序鉴定后,再将含RPS3a基因的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-RPS3a进行Pme Ⅰ酶线性化处理,转化到含有骨架质粒的BJ5183感受态菌,进行同源重组.鉴定后,经Pac Ⅰ线性化转染HEK293细胞,包装重组腺病毒.病毒感染NIH3T3细胞,Western blot 分析RPS3a蛋白的表达.结果 证实pAdTrack-CM V-RPS3a及pAdEas-RPS3a质粒构建正确;Western blot检测病毒感染的NIH3T3细胞总蛋白,与pAd-GFP阴性对照组相比,RPS3a蛋白表达量显著提高.结论 成功构建了能表达RPS3a基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其生物学功能奠定基础.
目的 構建覈糖體蛋白RPS3a的腺病毒錶達載體,併進一步驗證其在細胞中的錶達.方法 應用RT-PCR從人胚腎HEK293細胞的總RNA中反轉錄併擴增齣RPS3a基因,併將RPS3a亞剋隆到穿梭質粒pAdTrack-CMV中,酶切及測序鑒定後,再將含RPS3a基因的重組穿梭質粒pAdTrack-CMV-RPS3a進行Pme Ⅰ酶線性化處理,轉化到含有骨架質粒的BJ5183感受態菌,進行同源重組.鑒定後,經Pac Ⅰ線性化轉染HEK293細胞,包裝重組腺病毒.病毒感染NIH3T3細胞,Western blot 分析RPS3a蛋白的錶達.結果 證實pAdTrack-CM V-RPS3a及pAdEas-RPS3a質粒構建正確;Western blot檢測病毒感染的NIH3T3細胞總蛋白,與pAd-GFP陰性對照組相比,RPS3a蛋白錶達量顯著提高.結論 成功構建瞭能錶達RPS3a基因的重組腺病毒載體,為進一步研究其生物學功能奠定基礎.
목적 구건핵당체단백RPS3a적선병독표체재체,병진일보험증기재세포중적표체.방법 응용RT-PCR종인배신HEK293세포적총RNA중반전록병확증출RPS3a기인,병장RPS3a아극륭도천사질립pAdTrack-CMV중,매절급측서감정후,재장함RPS3a기인적중조천사질립pAdTrack-CMV-RPS3a진행Pme Ⅰ매선성화처리,전화도함유골가질립적BJ5183감수태균,진행동원중조.감정후,경Pac Ⅰ선성화전염HEK293세포,포장중조선병독.병독감염NIH3T3세포,Western blot 분석RPS3a단백적표체.결과 증실pAdTrack-CM V-RPS3a급pAdEas-RPS3a질립구건정학;Western blot검측병독감염적NIH3T3세포총단백,여pAd-GFP음성대조조상비,RPS3a단백표체량현저제고.결론 성공구건료능표체RPS3a기인적중조선병독재체,위진일보연구기생물학공능전정기출.
