CAJ | 학술논문

目的:本研究旨在利用细菌表面展示技术结合流式细胞术建立一种快速直观的抗原表位的新方法.方法:本研究以传染性法氏囊病毒结构蛋白VP2作为目标蛋白,对该方法的可行性进行检测.将VP2基因分为连续不重叠的5个基因片段(V1～V5).将各段基因分别克隆至细菌展示载体pAPEx中,转化大肠杆菌DH5 α,利用IPTG诱导使蛋白片段锚定表达于大肠杆菌细胞间质侧的内膜上,利用溶菌酶破除细菌外膜(原生质球制备),使蛋白片段暴露于原生质球表面.将该原生质球先后与传染性法氏囊病毒多克隆抗体和FITC标记的兔抗鸡抗体进行孵育,利用流式细胞仪(Flow cytometer,FC)检测原生质球的荧光信号强度.结果:FC结果显示,除V2片段外其余片段均有很强的荧光信号,其荧光强度为V3最强,V1、V4、V5其次.该结果说明V1、V3、V4、V5段存在抗原表位,V2段中无表位.为验证FC结果,本研究利用传统方法对各基因片段进行表达、纯化及Western blot鉴定,结果显示V3与多抗的结合能力最强,V2段无阳性反应,与FC结果相符.此外,本研究利用抗原表位分析软件对各蛋白片段潜在抗原表位进行预测,其结果与FC结果相一致.结论:本研究利用FC对抗原表位筛选过程进行实时监测,通过荧光信号强弱即可判断抗原表位是否存在及强弱,与传统抗原表位筛选方法相比,节省了时间提高了效率.利用该方法可以快速地筛选出优势表位,对于流行病病原的基础研究及疫苗的研制具有重要意义.
목적:본연구지재이용세균표면전시기술결합류식세포술건립일충쾌속직관적항원표위적신방법.방법:본연구이전염성법씨낭병독결구단백VP2작위목표단백,대해방법적가행성진행검측.장VP2기인분위련속불중첩적5개기인편단(V1～V5).장각단기인분별극륭지세균전시재체pAPEx중,전화대장간균DH5 α,이용IPTG유도사단백편단묘정표체우대장간균세포간질측적내막상,이용용균매파제세균외막(원생질구제비),사단백편단폭로우원생질구표면.장해원생질구선후여전염성법씨낭병독다극륭항체화FITC표기적토항계항체진행부육,이용류식세포의(Flow cytometer,FC)검측원생질구적형광신호강도.결과:FC결과현시,제V2편단외기여편단균유흔강적형광신호,기형광강도위V3최강,V1、V4、V5기차.해결과설명V1、V3、V4、V5단존재항원표위,V2단중무표위.위험증FC결과,본연구이용전통방법대각기인편단진행표체、순화급Western blot감정,결과현시V3여다항적결합능력최강,V2단무양성반응,여FC결과상부.차외,본연구이용항원표위분석연건대각단백편단잠재항원표위진행예측,기결과여FC결과상일치.결론:본연구이용FC대항원표위사선과정진행실시감측,통과형광신호강약즉가판단항원표위시부존재급강약,여전통항원표위사선방법상비,절성료시간제고료효솔.이용해방법가이쾌속지사선출우세표위,대우류행병병원적기출연구급역묘적연제구유중요의의.