中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2014年
3期
360-365,372
,共7页
段明慧%卢习%张伟%李玲玲%陈树林%赵善廷
段明慧%盧習%張偉%李玲玲%陳樹林%趙善廷
단명혜%로습%장위%리령령%진수림%조선정
子宫内电击转染%树突棘%神经纤维归巢%绿色荧光蛋白
子宮內電擊轉染%樹突棘%神經纖維歸巢%綠色熒光蛋白
자궁내전격전염%수돌극%신경섬유귀소%록색형광단백
In utero electroporation%Dendritic spines%Axonal projection%GFP
目的:建立鼠胚子宫内电击转染技术体系(In utero electroporation,IUE),探究该技术在研究神经元发育包括树突棘形成及神经纤维归巢(轴突投射)中应用的可行性.方法:构建带pCAG启动子表达绿色荧光蛋白(Green fluorescentprotein,GFP)的质粒,并将该质粒利用子宫内电击转染技术转染到孕期15.5 d(E15.5)鼠胚大脑皮质的新生神经元中.待小鼠出生后(P0)及第28 d(P28)用4％多聚甲醛活体灌注固定,振荡切片机切片,免疫荧光组织化学染色,激光共聚焦显微镜观察拍照.结果:在出生后P28小鼠被转染一侧的大脑皮质内有大量被GFP标记的细胞,呈现典型的神经元形态特征,从胞体发出大量树突,树突表面有大量大小不等、形态不一的小棘,被标记神经元的轴突通过胼胝体投射到对侧海马和大脑皮质.结论:子宫内电击转染技术能成功转染大脑皮质神经元,由CAG启动的GFP表达载体能够在被转染的神经元中长时程高效表达GFP,并标记被转染神经元的所有细胞结构包括树突、轴突及树突棘,该技术可用于研究各种不同基因在小棘发育及神经纤维归巢中的作用.
目的:建立鼠胚子宮內電擊轉染技術體繫(In utero electroporation,IUE),探究該技術在研究神經元髮育包括樹突棘形成及神經纖維歸巢(軸突投射)中應用的可行性.方法:構建帶pCAG啟動子錶達綠色熒光蛋白(Green fluorescentprotein,GFP)的質粒,併將該質粒利用子宮內電擊轉染技術轉染到孕期15.5 d(E15.5)鼠胚大腦皮質的新生神經元中.待小鼠齣生後(P0)及第28 d(P28)用4％多聚甲醛活體灌註固定,振盪切片機切片,免疫熒光組織化學染色,激光共聚焦顯微鏡觀察拍照.結果:在齣生後P28小鼠被轉染一側的大腦皮質內有大量被GFP標記的細胞,呈現典型的神經元形態特徵,從胞體髮齣大量樹突,樹突錶麵有大量大小不等、形態不一的小棘,被標記神經元的軸突通過胼胝體投射到對側海馬和大腦皮質.結論:子宮內電擊轉染技術能成功轉染大腦皮質神經元,由CAG啟動的GFP錶達載體能夠在被轉染的神經元中長時程高效錶達GFP,併標記被轉染神經元的所有細胞結構包括樹突、軸突及樹突棘,該技術可用于研究各種不同基因在小棘髮育及神經纖維歸巢中的作用.
목적:건립서배자궁내전격전염기술체계(In utero electroporation,IUE),탐구해기술재연구신경원발육포괄수돌극형성급신경섬유귀소(축돌투사)중응용적가행성.방법:구건대pCAG계동자표체록색형광단백(Green fluorescentprotein,GFP)적질립,병장해질립이용자궁내전격전염기술전염도잉기15.5 d(E15.5)서배대뇌피질적신생신경원중.대소서출생후(P0)급제28 d(P28)용4％다취갑철활체관주고정,진탕절편궤절편,면역형광조직화학염색,격광공취초현미경관찰박조.결과:재출생후P28소서피전염일측적대뇌피질내유대량피GFP표기적세포,정현전형적신경원형태특정,종포체발출대량수돌,수돌표면유대량대소불등、형태불일적소극,피표기신경원적축돌통과변지체투사도대측해마화대뇌피질.결론:자궁내전격전염기술능성공전염대뇌피질신경원,유CAG계동적GFP표체재체능구재피전염적신경원중장시정고효표체GFP,병표기피전염신경원적소유세포결구포괄수돌、축돌급수돌극,해기술가용우연구각충불동기인재소극발육급신경섬유귀소중적작용.
