解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2013年
4期
535-540
,共6页
葛丽%杜辉%刘立伟%苏衍萍
葛麗%杜輝%劉立偉%囌衍萍
갈려%두휘%류립위%소연평
卵母细胞%孤雌激活%体外培养%胚胎培养%小鼠
卵母細胞%孤雌激活%體外培養%胚胎培養%小鼠
란모세포%고자격활%체외배양%배태배양%소서
Oocyte%Parthenogenetic activation%In vitro culture%Embryo culture%Mouse
目的 探讨激素刺激时间、体外培养时间对小鼠卵母细胞核成熟及不同激活方案对卵母细胞孤雌激活、胚胎发育能力的影响.方法 孕马血清促性腺激素(PMSG)超排处理,在体外培养的不同时间点检测卵母细胞核成熟率(每个处理至少重复3次,3只/重复,以下实验相同).分别采用乙醇结合6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)法和SrCl2法激活卵母细胞,胚胎培养液选用CZB[胎牛血清(FBS)或牛血清清蛋白(BSA)]两种,确定最佳激活方案.对不同时间点成熟的卵母细胞进行激活,确定最佳激活卵龄.研究缩短PMSG刺激时间对卵母细胞发育的影响.结果 将PMSG刺激时间从46h缩短至24h,卵母细胞获得最高核成熟率(97.6％ vs 91.9％)的培养时间由14h延长至16h;缩短PMSG刺激时间,核成熟率不受影响,但能显著降低激活率(91.2％ vs37.1％)和囊胚率(20.9％ vs0.0％).两种方法体内成熟卵母细胞激活率均高于90％,但囊胚率差异显著(P＜0.05).卵母细胞体外培养至24～26h时,激活率(89.5％)和囊胚率(21.9％)均达到最高点.结论 建立了一种小鼠卵母细胞体外成熟培养系统,即PMSG超排处理46h、卵母细胞培养24h,CZB(10mmol/L SrCl2)激活2.5h后采用CZB (0.5％ BSA)进行胚胎培养.
目的 探討激素刺激時間、體外培養時間對小鼠卵母細胞覈成熟及不同激活方案對卵母細胞孤雌激活、胚胎髮育能力的影響.方法 孕馬血清促性腺激素(PMSG)超排處理,在體外培養的不同時間點檢測卵母細胞覈成熟率(每箇處理至少重複3次,3隻/重複,以下實驗相同).分彆採用乙醇結閤6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)法和SrCl2法激活卵母細胞,胚胎培養液選用CZB[胎牛血清(FBS)或牛血清清蛋白(BSA)]兩種,確定最佳激活方案.對不同時間點成熟的卵母細胞進行激活,確定最佳激活卵齡.研究縮短PMSG刺激時間對卵母細胞髮育的影響.結果 將PMSG刺激時間從46h縮短至24h,卵母細胞穫得最高覈成熟率(97.6％ vs 91.9％)的培養時間由14h延長至16h;縮短PMSG刺激時間,覈成熟率不受影響,但能顯著降低激活率(91.2％ vs37.1％)和囊胚率(20.9％ vs0.0％).兩種方法體內成熟卵母細胞激活率均高于90％,但囊胚率差異顯著(P＜0.05).卵母細胞體外培養至24～26h時,激活率(89.5％)和囊胚率(21.9％)均達到最高點.結論 建立瞭一種小鼠卵母細胞體外成熟培養繫統,即PMSG超排處理46h、卵母細胞培養24h,CZB(10mmol/L SrCl2)激活2.5h後採用CZB (0.5％ BSA)進行胚胎培養.
목적 탐토격소자격시간、체외배양시간대소서란모세포핵성숙급불동격활방안대란모세포고자격활、배태발육능력적영향.방법 잉마혈청촉성선격소(PMSG)초배처리,재체외배양적불동시간점검측란모세포핵성숙솔(매개처리지소중복3차,3지/중복,이하실험상동).분별채용을순결합6-이갑안기표령(6-DMAP)법화SrCl2법격활란모세포,배태배양액선용CZB[태우혈청(FBS)혹우혈청청단백(BSA)]량충,학정최가격활방안.대불동시간점성숙적란모세포진행격활,학정최가격활란령.연구축단PMSG자격시간대란모세포발육적영향.결과 장PMSG자격시간종46h축단지24h,란모세포획득최고핵성숙솔(97.6％ vs 91.9％)적배양시간유14h연장지16h;축단PMSG자격시간,핵성숙솔불수영향,단능현저강저격활솔(91.2％ vs37.1％)화낭배솔(20.9％ vs0.0％).량충방법체내성숙란모세포격활솔균고우90％,단낭배솔차이현저(P＜0.05).란모세포체외배양지24～26h시,격활솔(89.5％)화낭배솔(21.9％)균체도최고점.결론 건립료일충소서란모세포체외성숙배양계통,즉PMSG초배처리46h、란모세포배양24h,CZB(10mmol/L SrCl2)격활2.5h후채용CZB (0.5％ BSA)진행배태배양.
